Development of synovial sarcoma patient model for new drug therapy

用于新药治疗的滑膜肉瘤患者模型的开发

• 批准号: 22K16770
• 负责人: 川端 佑介
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16770/
• 关键词: 滑膜肉腫; 融合遺伝子; 遺伝子修飾技術; 動物モデル

本研究では滑膜肉腫特異的な融合遺伝子であるSS18-SSX1融合遺伝子の遺伝子操作を予定している。遺伝子操作にはCRISPR CAS9システムを用いた融合遺伝子の内在性の誘導法と、従来のウイルスベクターによる人工融合遺伝子の導入法を用いて、両郡の細胞からの発現解析を行う。本研究において、遺伝子修飾技術が問題なく使用できるか事前検証する必要があった。そこで、同様に融合遺伝子の誘導法が議論されている粘液型脂肪肉腫のFUS-DDIT3を対象として上記実験を開始した。まずは従来の方法であるウイルスベクターを用いた融合遺伝子の強制導入・発現実験は首尾よく成果が得られている。レンチウイルスに２種類の制限酵素を用いて人工融合遺伝子をクローニングし、大腸菌内で増幅させプラスミドベクターを精製した。 パッケージング細胞にコトランスフェクションさせ、形成されるウイルスコアは細胞膜に輸送され、感染性のウイルス粒子として細胞膜から出芽し培地中に放出される。これを、マウス線維芽細胞(3T3L1)細胞に感染導入を試みた。さらに、このベクターはネオマイシン耐性遺伝子を発現するため、同抗生剤下に細胞を培養し細胞選択を行った。得られた細胞株よりDNA、cDNR(RNA)、タンパク質と順に発現を確認した。現在は、同細胞株と正常細胞(3T3L1)をヌードマウスに皮下投与し腫瘍形成能の評価を行っている。一方、CRISPR/CAS9システムを用いた方法では、最適なガイドRNAをFusのイントロン7とDdit3のイントロン1を標的として設計し、 ガイドRNAとCas9 Nickaseを同時に発現させるベクターにそれぞれの標的配列をアニーリングし、ベクターを構築した。 トランスフェクションはLipofectamine を用いた。現在までに数回に渡り標的融合遺伝子の転座誘導をDNAで確認した。

In this study, we studied the fusion of synovial meat, the fusion of SS18-SSX1, the operation of synovium, the prediction of synovium, the fusion of synovium and synovium. In the sub-operation, the CRISPR CAS9 operation is used to fuse the intrinsic property of the sub-system, and the artificial fusion method is used to analyze the existing data. In this study, it is necessary to study the technical problems of the students in this study. In this paper, we discuss the method of fusing fat meat in the same way as in the same way. The FUS-DDIT3 of mucinous fat meat is similar to that of the fat meat on the floor. In this way, you can use the integration sub-system to force you to get the results from the first to the end. In this paper, we use the method of artificial fusion for the production of enzyme restriction enzymes, such as the artificial fusion of bacteria, the production of restriction enzymes, the production of restriction enzymes, the artificial fusion of bacteria and bacteria. In the culture of the cell, the cell membrane, the buds, the buds. The infection of germ cells (3T3L1) was detected in the experimental group. Please tell me how to be patient. You can learn how to be patient. Under the same antifungal drug, you can choose the right cell. The cell lines were identified as DNA, cDNR (RNA), and so on. At present, the same cell strain can be injected subcutaneously with the same cell strain of normal cell (3T3L1). On the one hand, the CRISPR/CAS9 system uses a simple method, the most important thing is to use the RNA Fus device, and the most important thing is to check the device design of the Ddit3 system. At the same time, the RNA device is used to check the configuration of the system and the configuration of the device. I don't know what to do. I don't know what to Lipofectamine. Now we are going to use DNA to confirm the location of the fusion seat of the ferry station.