腎癌薬剤耐性獲得におけるBCL2A1の機能解析と新規治療戦略の開発

腎癌は、細胞傷害性抗癌剤や放射線治療に対して抵抗性である。現在、開発・承認されている分子標的薬、免疫チェックポイント阻害剤においても、多くの患者で初期耐性や獲得耐性がみられる。本研究では、内因性アポトーシスを調整するBCL2ファミリータンパクのうち、抗アポトーシス作用のBCL2A1が腎癌のアポトーシス回避機構に関与すると仮定し、その作用の解析と阻害効果について検討した。腎癌細胞株（786-O、A-498、769-P）を用いてBCL2ファミリータンパクの発現をウエスタンブロット法で確認すると、786-OはBCL2A1高発現株、769-P、A-498は低発現株であり、786-Oに対して、siRNA法を用いてBCL2A1をノックダウンすると、有意な細胞生存率の低下を示した。また、BCL2A1ノックダウンによるBCL2ファミリータンパクの変化を確認すると、アポトーシス促進性に働くBAK、BIM、BAD、BID、NOXAの発現が上昇する一方で、アポトーシス抑制性に働くMCL-１、BCL-2の発現が上昇していた。このことから、アポトーシス抑制性に働くタンパクのうち、MCL-1やBCL-2よりもBCL2A1の方が細胞生存に重要な役割を持っていることが示唆された。さらに、BCL2A1阻害効果を確認するため、汎BCL2阻害剤であるsabutoclax（BCL2A1、BCL2、BCLxLおよびMCL-1阻害）とAT101（BCL2、BCLxLおよびMCL-1阻害）をそれぞれの細胞株に添加すると、いずれの細胞株でもAT101よりsabutoclaxのIC50が著明に低濃度であり、BCL2A1阻害作用の重要性が確認された。また、BCL2A1高発現である786-Oではsabutoclaxの濃度依存性に細胞生存率が低下したが、769-P、A-498では、高濃度にしても一定以上の効果が得られなかった。

腎癌は、細胞傷害性抗癌剤や放射線治療に対して抵抗性である。現在、開発・承認されている分子標的薬、免疫チェックポイント阻害剤においても、多くの患者で初期耐性や獲得耐性がみられる。本研究では、内因性アポトーシスを調整するBCL2ファミリータンパクのうち、抗アポトーシス作用のBCL2A1が腎癌のアポトーシス回避機構に関与すると仮定し、その作用の解析と阻害効果について検討した。腎癌細胞株（786-O、A-498、769-P）を用いてBCL2ファミリータンパクの発現をウエスタンブロット法で確認すると、786-OはBCL2A1高発現株、769-P、A-498は低発現株であり、786-Oに対して、siRNA法を用いてBCL2A1をノックダウンすると、有意な細胞生存率の低下を示した。また、BCL2A1ノックダウンによるBCL2ファミリータンパクの変化を確認すると、アポトーシス促進性に働くBAK、BIM、BAD、BID、NOXAの発現が上昇する一方で、アポトーシス抑制性に働くMCL-１、BCL-2の発現が上昇していた。このことから、アポトーシス抑制性に働くタンパクのうち、MCL-1やBCL-2よりもBCL2A1の方が細胞生存に重要な役割を持っていることが示唆された。さらに、BCL2A1阻害効果を確認するため、汎BCL2阻害剤であるsabutoclax（BCL2A1、BCL2、BCLxLおよびMCL-1阻害）とAT101（BCL2、BCLxLおよびMCL-1阻害）をそれぞれの細胞株に添加すると、いずれの細胞株でもAT101よりsabutoclaxのIC50が著明に低濃度であり、BCL2A1阻害作用の重要性が確認された。また、BCL2A1高発現である786-Oではsabutoclaxの濃度依存性に細胞生存率が低下したが、769-P、A-498では、高濃度にしても一定以上の効果が得られなかった。