歯周病原細菌Treponema denticola の環境ストレス応答機構の解明

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Toreponema denticola の遺伝子であるTDE_0127が，T. denticola においてどのような機能を果たしているかについて解明するため，TDE_0127遺伝子欠損株を作出した。TDE_0127が発現調節すると思われる遺伝子群を明らかにするため，欠損株のDNA マイクロアレイ解析を行った。その結果，野生株と比較して，本菌の表層タンパク質発現に関与する可能性のある遺伝子を含む，さまざまな遺伝子の発現変動を認めた。TDE_0127はDNA binding protein をコードするとされ，転写調節因子として表層タンパク質発現に関与する遺伝子群の調節に関わることが示唆された。また，酸素ストレス応答への関与について検討するため，酸素ストレス耐性能について，ATPアッセイを用いて評価した。その結果，野生株と比較し，欠損株は酸素曝露下の生菌数の有意な減少を認めた。TDE_0127がコードするDNA binding protein は，酸素ストレスに対する応答に関わっていることが示唆された。RNA-seq の結果，本菌の表層タンパク質であるLrrタンパク質をコードする遺伝子の発現量が，野生株と比較し有意に増加した。Lrrタンパク質の抗体を用いて，ウエスタンブロット解析を行った。画像解析ソフトを用いてLrrタンパク質のバンドの濃度をもとに，タンパク質発現量を評価した。欠損株におけるLrrタンパク質の発現量は，野生株と比較して有意に増加した。これらの結果から，DNA binding protein をコードするTDE_0127は本菌の表層タンパク質であるLrrタンパク質の発現調節に関与することが示唆された。