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多能性を維持したVitrification歯根膜幹細胞スフェロイド確立の試み

尝试建立保持多能性的玻璃化牙周膜干细胞球体

基本信息

批准号：
22K17096
负责人：
佐野孝太朗
金额：
$ 3万
依托单位：
Kyushu Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

歯根膜幹細胞を3次元的に培養した歯根膜幹細胞スフェロイドは、これまでの研究により、一般的な単層培養細胞と比較して生理的機能が向上しており、歯周組織再生に有効であることが報告されている。ところが、スフェロイド作製に十分な細胞数を確保するまで歯根膜幹細胞を培養・継代する必要があること、スフェロイド作製用マイクロウェルチップに細胞を播種する前にチップに表面処理等の準備をする必要があること、チップに播種した後も歯根膜幹細胞が凝集しスフェロイドを形成するまで培養を続けること、等の理由で、歯根膜幹細胞スフェロイドを入手するまでにある程度の時間を要する。このことは歯根膜幹細胞スフェロイドの今後の臨床応用に向けての実用性・工程の簡便性を考慮すると、障害になる可能性があった。そこで、歯根膜幹細胞スフェロイドをガラス化法（Vitrification）により凍結し、多分化能および組織再生能を維持したまま長期保存することで、必要な際に即時入手可能となる環境構築を試みた。今年度は歯根膜幹細胞スフェロイドを2種類の凍結法；ガラス化法および緩慢凍結法（Slow freezing）により凍結・一定期間保存後した後に解凍し、凍結前後で形態および多分化能に変化するか検討を行った。歯根膜幹細胞スフェロイドを凍結し、7日（短期）・30日（中期）の保存後解凍した。形態は球状を維持していた。リアルタイムPCR法にて幹細胞性の指標となるOCT4、NANOGの発現を確認したところ、凍結前と概ね変化は見られなかった。Live/Dead染色より、生存率についてはガラス化法が緩慢凍結法に比べて優れていることが明らかになった。現在、より長期（90日）の保存条件での検討を行っている。

3-D culture of dental root membrane stem cells, dental root membrane stem cells. The root membrane stem cells must be cultured before sowing. Root membrane stem cell development depends on the degree and timing of initiation. This paper discusses the feasibility and feasibility of root membrane stem cell development for future clinical applications. The root membrane stem cells can be frozen, differentiated and regenerated for a long time, and the environment can be constructed immediately if necessary. This year, there are two kinds of freezing methods for root membrane stem cells: freezing method and slow freezing method. The freezing method is carried out after a certain period of storage, thawing, morphology and differentiation ability before and after freezing. Root membrane stem cells are thawed after freezing, 7 days (short term) and 30 days (medium term) of preservation. The shape is spherical. 4. Identification of NANOG by PCR and identification of pre-freezing changes Live/Dead staining, survival rate, slow freezing method, better than slow freezing method Now,