地域住民における腸管への口腔細菌異所性定着とそのリスク因子の解明

当地居民肠道口腔细菌异位定植及其危险因素分析

基本信息

批准号：
22K17269
负责人：
影山伸哉
金额：
$ 3万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、唾液検体ならびに便検体のマイクロバイオーム解析を行った。唾液検体、便検体からのDNA抽出はすでに完了しており、まずはPCR法を用いて採取した検体に含まれる16S rRNA遺伝子の全長を網羅的に増幅した。プライマーにはサンプル識別用の8塩基のタグ配列を付与した8Fと1492Rを使用した。ロングリードシークエンサーのPacBio Sequel IIを用いて、得られた増幅断片の塩基配列を解読し、各検体に含まれる細菌構成を明らかにした。この解析手法では細菌の識別に用いる16S rRNA遺伝子の可変領域（V1-V9領域）の塩基配列が全て解読されるため、遺伝子の相同性の高い細菌についても高解像度に識別することが可能となる。そのため、口腔マイクロバイオームと腸管マイクロバイオームから検出された細菌が同一細菌かどうかをより高精度に検証できる。得られた塩基配列を解析した結果、唾液マイクロバイオームと腸管マイクロバイオームが大きく異なる細菌構成を示す一方、StreptococcusやVeillonellaは口腔と腸管から共通して検出されることが明らかとなった。また、これらの細菌は一部の対象者の腸管マイクロバイオームにおいて高い比率を占めていた。これらの結果より、口腔細菌が腸管まで到達していることが示唆された。現在はさらなる解析を継続中である。

今年，对唾液和粪便样品进行了微生物组分析。从唾液和粪便标本中提取DNA已经完成，首先全面放大了使用PCR收集的标本中包含的16S rRNA基因的全长。引物为8F和1492R，给出了8个碱基的TAG序列，用于样品识别。使用长读取Sequencer PACBIO续集II解码所获得的扩增片段的核苷酸序列，以阐明每个样品中包含的细菌组成。该分析方法解码了16S rRNA基因的可变区域（V1-V9区）的所有核苷酸序列，该基因用于鉴定细菌，从而可以鉴定具有高分辨率高分辨率的细菌。因此，可以更准确地验证口腔微生物组和肠道微生物组中检测到的细菌是否是相同的细菌。所得的碱基序列分析表明，虽然唾液微生物组和肠道微生物组表现出非常不同的细菌组成，但在口腔和肠道中通常检测到链球菌和Veillonella链球菌和Veillonella。此外，这些细菌占某些受试者的肠道微生物中的很高比例。这些结果表明口腔细菌已经达到肠道。目前正在进行进一步的分析。