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免疫組織化学の新技法「微粒子標識抗体染色」の確立

建立免疫组织化学新技术“细颗粒标记抗体染色”

基本信息

批准号：
22K18227
负责人：
坂部名奈子
金额：
$ 3万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

形態像の観察から良悪性を判定する細胞診は侵襲性の少ない検査であるものの、判定するには経験による能力・知識に頼ることが多い。細胞診でも行われている免疫組織化学・酵素抗体法は、診断補助として広く用いられており、現在では必要不可欠となっている。しかし、免疫組織化学は操作が煩雑で時間を要し、非特異反応や発色過程での問題も存在する。本研究では、これらの問題を回避した免疫組織化学の新技法を確立するために、様々な大きさ・色彩などの微粒子を使用した微粒子標識抗体の作製を目的としている。本年度は免疫組織化学で膜抗原の発現が確認された市販の細胞株を使用して単染色による検討を進めた。多くの上皮細胞が保有している上皮膜抗原・クローンBer-EP4の使用を候補に挙げたが、抗体濃度に問題が生じ、別クローンの抗体を選定して遂行している。2色の微粒子を用いて、化学的または物理的に反応させて作製した微粒子標識抗体を使用した結果、細胞に微粒子標識抗体が結合するのを確認できた。しかし、細胞に結合した微粒子標識抗体量が少なかったため、微弱な判定結果となった。感度を上げるために、物理的吸着におけるpH設定の変更を試みたが、反応性に大きな差は認められなかった。当初予定していたワンステップ法からツーステップ法へと変更し、新たに微粒子標識2次抗体の作製を行った。その結果、ワンステップ法より強い反応を確認することができたものの、非特異反応の問題が発生した。現在は、この反応を回避するため、細胞と微粒子標識抗体の反応条件（反応時間・濃度・ブロッキング剤）を検討し、最適な条件を探索中である。

Morphological examination, evaluation, evaluation Immunohistochemistry, enzyme antibody, cytochemistry, immunochemistry, enzyme antibody, immunochemistry, enzyme antibody, immunochemistry, immunochemistry, enzyme antibody, immunochemistry, immunochemistry. There are problems with the timing of immunohistochemical procedures and nonspecific staining processes. The purpose of this study is to avoid the problem of establishing a new technique for immunohistochemistry, using color particles, and making antibodies for particle identification. This year, the detection of membrane antigens was confirmed by immunohistochemistry, and the use of cell lines was further discussed. Many epithelial cells retain epithelial membrane antigens, and the use of Ber-EP4 is a candidate for selection, antibody concentration, and antibody selection. 2. The use of color particles, chemical reactions, and the use of particle identification antibodies, cell identification antibodies, and binding confirmation The amount of antibody labeled by micro-particles bound to cells is small and weak. Sensitivity, physical adsorption, pH setting, and reaction A new method for the production of secondary antibodies was developed. As a result, the problem of non-specific reactions arises because of the strong reaction between the two methods. Now we are exploring the optimal reaction conditions (reaction time, concentration, reaction time) for cell and microparticle identification antibody.