免疫組織化学の新技法「微粒子標識抗体染色」の確立

建立免疫组织化学新技术“细颗粒标记抗体染色”

• 批准号: 22K18227
• 负责人: 坂部 名奈子
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K18227/
• 关键词: 微粒子標識抗体染色; 免疫組織化学; 膜抗原; 非特異反応; ワンステップ法; ツーステップ法

形態像の観察から良悪性を判定する細胞診は侵襲性の少ない検査であるものの、判定するには経験による能力・知識に頼ることが多い。細胞診でも行われている免疫組織化学・酵素抗体法は、診断補助として広く用いられており、現在では必要不可欠となっている。しかし、免疫組織化学は操作が煩雑で時間を要し、非特異反応や発色過程での問題も存在する。本研究では、これらの問題を回避した免疫組織化学の新技法を確立するために、様々な大きさ・色彩などの微粒子を使用した微粒子標識抗体の作製を目的としている。本年度は免疫組織化学で膜抗原の発現が確認された市販の細胞株を使用して単染色による検討を進めた。多くの上皮細胞が保有している上皮膜抗原・クローンBer-EP4の使用を候補に挙げたが、抗体濃度に問題が生じ、別クローンの抗体を選定して遂行している。2色の微粒子を用いて、化学的または物理的に反応させて作製した微粒子標識抗体を使用した結果、細胞に微粒子標識抗体が結合するのを確認できた。しかし、細胞に結合した微粒子標識抗体量が少なかったため、微弱な判定結果となった。感度を上げるために、物理的吸着におけるpH設定の変更を試みたが、反応性に大きな差は認められなかった。当初予定していたワンステップ法からツーステップ法へと変更し、新たに微粒子標識2次抗体の作製を行った。その結果、ワンステップ法より強い反応を確認することができたものの、非特異反応の問題が発生した。現在は、この反応を回避するため、細胞と微粒子標識抗体の反応条件（反応時間・濃度・ブロッキング剤）を検討し、最適な条件を探索中である。

细胞学确定患者是从观察形态图像的观察中是良性还是恶性的，它是一种侵入性较小的测试，但通常依赖于基于经验的能力和知识来确定它。也用于细胞学中的免疫组织化学和酶免疫学方法被广泛用作诊断辅助工具，现在至关重要。但是，免疫组织化学是复杂且耗时的，非特异性反应和颜色开发过程存在问题。这项研究旨在使用各种尺寸和颜色的微粒创建微粒标记的抗体，以建立避免这些问题的新的免疫组织化学技术。今年，我们使用单一染色使用市售细胞系进行了一项研究，该细胞系通过免疫组织化学证实了膜抗原的表达。许多上皮细胞进行的上皮膜抗原克隆BER-EP4被列为候选者，但抗体浓度是有问题的，并且选择了另一个克隆的抗体并进行了进行。由于使用由化学或物理与两个有色颗粒反应产生的微粒标记的抗体，因此可以证实，微颗粒标记的抗体结合到细胞。但是，与细胞结合的微粒标记抗体的量很小，导致判断较弱。为了提高灵敏度，我们试图改变物理吸附中的pH设置，但没有观察到反应性的显着差异。最初计划的一步方法更改为两步法，并产生了新的微粒标记的二抗。结果，尽管确认了比一步法的反应更强，但非特异性反应的问题发生了。目前，为了避免这种反应，我们正在研究细胞和微粒标记的抗体之间的反应条件（反应时间，浓度，阻断剂），并正在寻找最佳条件。