免疫組織化学の新技法「微粒子標識抗体染色」の確立

建立免疫组织化学新技术“细颗粒标记抗体染色”

• 批准号: 22K18227
• 负责人: 坂部 名奈子
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K18227/
• 关键词: 微粒子標識抗体染色; 免疫組織化学; 膜抗原; 非特異反応; ワンステップ法; ツーステップ法

形態像の観察から良悪性を判定する細胞診は侵襲性の少ない検査であるものの、判定するには経験による能力・知識に頼ることが多い。細胞診でも行われている免疫組織化学・酵素抗体法は、診断補助として広く用いられており、現在では必要不可欠となっている。しかし、免疫組織化学は操作が煩雑で時間を要し、非特異反応や発色過程での問題も存在する。本研究では、これらの問題を回避した免疫組織化学の新技法を確立するために、様々な大きさ・色彩などの微粒子を使用した微粒子標識抗体の作製を目的としている。本年度は免疫組織化学で膜抗原の発現が確認された市販の細胞株を使用して単染色による検討を進めた。多くの上皮細胞が保有している上皮膜抗原・クローンBer-EP4の使用を候補に挙げたが、抗体濃度に問題が生じ、別クローンの抗体を選定して遂行している。2色の微粒子を用いて、化学的または物理的に反応させて作製した微粒子標識抗体を使用した結果、細胞に微粒子標識抗体が結合するのを確認できた。しかし、細胞に結合した微粒子標識抗体量が少なかったため、微弱な判定結果となった。感度を上げるために、物理的吸着におけるpH設定の変更を試みたが、反応性に大きな差は認められなかった。当初予定していたワンステップ法からツーステップ法へと変更し、新たに微粒子標識2次抗体の作製を行った。その結果、ワンステップ法より強い反応を確認することができたものの、非特異反応の問題が発生した。現在は、この反応を回避するため、細胞と微粒子標識抗体の反応条件（反応時間・濃度・ブロッキング剤）を検討し、最適な条件を探索中である。

In the form of observation, good sex determines that it is less invasive, less invasive, less invasive The immunohisto-chemical enzyme antibody method was used in this study, and the enzyme antibody method was used to help the immune tissue. Now, it is necessary to pay attention. There are some problems with the operation of immune tissue chemistry, such as time response, and non-specific anti-color process monitoring. In this study, we avoid the problem of immuno-histochemistry. The new technique of immuno-histochemistry is to make sure that the antibody of microparticle identification is used for the purpose of identification of microparticles. In this year's immunocytochemistry, the membrane antigen assay has confirmed that the cell lines in the market have been improved by means of immunostaining. Multiple epithelial cells retain specific epithelial membrane antigens. Ber-EP4 uses candidate antigens, antibody titers, antibody titers, and specific antibodies. 2 chromatic microparticles were used to identify antibodies using chemical and chemical methods, physical antibodies were used to identify antibodies, results were used to identify antibodies to microparticles, and antibodies were used in combination with antibodies to identify microparticles. The results of the combination of microparticle markers and microparticle markers show that the volume of resistance is low, and the results of weak determination are significant. The sensitivity is different, the physical suction pH settings are more sensitive, and the repercussions are different. At the beginning, it was determined that the antibody should be used twice to identify the microparticle. The results show that you are not responsible for confirming that you are not responsible for any specific problems. At present, we are in the process of avoiding anti-virus, cell-based micro-particle identification antibody reaction conditions (anti-time response conditions), and in the exploration of optimal conditions.