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前シナプスCa電流の促進機構に関する研究

突触前Ca电流促进机制研究

基本信息

批准号：
09780764
负责人：
辻本哲宏
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780764/
关键词：
蛋白燐酸化酵素 G蛋白 Ca^<2+>電流ホールセル・パッチシナプス終末

项目摘要

生後9-17日齢のラット延髄をハロセン麻酔下で摘出し、厚さ150μMスライス標本を作製した。CCDカメラを装着した微分干渉型顕微鏡にてラット台形体内側核ニューロンを同定した。細胞体表面に形成される巨大シナプス(the Calyx of Held)にホールセルパッチ法を適用し、電位依存性Na^+電流、K^+電流は細胞外液にTTX1μM、TEA10mM添加することで抑制した条件下で前シナプスCa^<2+>電流(IpCa)を記録した。脱分極パルス(-10mV;1 ms)を200ms以下の間隔で2回与え、IpCaテール電流を誘発した。昨年度の成果で前シナプスCa電流の促進は細胞外からのカルシウム流入量に依存することが判明した。本年度の研究結果は以下の通りであった。(1) 蛋白質燐酸化酵素、脱燐酸化酵素阻害であるH7、KN-62、Calyculin-A、Deltamethrinを前シナプス内にホールセルにて導入しても、Ca電流の促進は抑制されなかったことから、少なくともこれら阻害剤に感受性のある蛋白燐酸化酵素・脱燐酸化酵素は関与しないと結論された。(2) 前シナプス内にGTPγSを導入するとIpCaの大きさは小さくなりrising phaseも遅くなった。しかしIpCaの促進にはなんの影響も認められなかった。GDP-βSを前シナプスに導入した場合は、IpCaの促進が増強される傾向が認められたが、実験例を増やしても統計的に有意に異なると結論できるまでには至っていない。この問題は、単一の前シナプスでコントロールとGDPβSの両条件での1pCaの促進を比較することでより厳密に比較できると期待される。一方、GDPβS存在下で100Hz・10秒の連発刺激をおこなったがIpCa電流の不活性化は消失したが、長時間(2秒)の脱分極によるIpCa電流の不活性化は認められたことから不活性過程に関与する可能性が示唆された。(3) ケージドCa緩衝試薬を用い、細胞内Ca濃度を瞬時に上昇させると一発目のIpCa電流が増加し、IpCaの促進は抑制された。しかしながらS/N比が小さいために、単一シナプスでの細胞内Ca濃度の測定を数十ミリ秒の精度で測定できておらず、定性的結論に留まった。

9 - 17 days after birth, the color of the film was extracted from the film and the film thickness was 150 μ M. CCD micro-mirror is installed on the inside of the platform. The Calyx of Held (Calyx of Held) method was applied to cell surface formation, and potential-dependent Na ^+ and K ^+ currents were recorded. The Ca ^<2 +> current (IpCa) was also recorded in the extracellular solution when TTX 1 μ M and TEA 10 mM were added. Depolarization (-10mV; 1 ms): 2 cycles at intervals of 200 ms or less, IpCa current induced. The results of the previous year showed that the enhancement of Ca current depended on extracellular Ca influx. The results of this year's research are as follows: (1)Protein phosphorylase, dephosphorylase inhibitor, H7, KN-62, Calyculin-A, Deltamethrin inhibitor, Ca current promoter, inhibitor, protein phosphorylase, dephosphorylase inhibitor (2)Before the introduction of GTP γ S into the IpCa, the rising phase was reduced. IpCa promotes the development of new technologies. GDP-β S is the first factor to be introduced, and IpCa is the second factor to be promoted. This problem is related to the comparison between the conditions of GDP β S and the promotion of Ca. The inactivation of IpCa current in the presence of GDP β S for 100 Hz·10 s was observed and the inactivation of IpCa current in the presence of GDP β S for a long time (2 s) was observed. (3)The intracellular Ca concentration increases instantaneously, and the IpCa current increases, and the IpCa promotion decreases. The S/N ratio is very small, and the intracellular Ca concentration is measured with a precision of tens of seconds.