内因性D-アミノ酸含有ペプチド、achatin-Iの生成機構の解明

阐明内源性含 D-氨基酸肽、achatin-I 的生产机制

• 批准号: 10740392
• 负责人: 佐竹 炎
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Suntory Institute for Bioorganic Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10740392/
• 关键词: アフリカマイマイ; achatin-I; fulicin; cDNA; 異性化酵素; D-アミノ酸含有ペプチド; in situ hybridization

achatin-Iはアフリカマイマイの神経節および心房から単離された強力な心臓興奮作用をペプチドであり、N末から2残基目にD-Pheを有することが特徴である。一方、全ての残基がL-型であるachatin-IIも同定されていることから、achatin-I中のD-Pheは前駆体中のL-Pheがプロセッシングの過程で酵素的に異性化されることによって生成すると考えられたが、ペプチド中のアミノ酸を異性化する仕組みの詳細は不明である。そこで、このような異性化を触媒する「異性化酵素」を単離・同定し、反応機構を解明することによりペプチド中のアミノ酸異性化の一般原理を確立する方針を立てた。異性化酵素はachatin-I生成に関わる酵素であるから、achatin-I遺伝子が多量に発現している組織・器官に局在している可能性が極めて高いと推定した。そこで、まずachatin-I遺伝子をクローニングして、achatin-I遺伝子発現部位を特定することを目指した。その結果、achatin-IのcDNAクローニングに成功しachatin-I遺伝子は食道下神経節のpedal ganglion領域のみに特異的に発現していることを、RT-PCRおよびin situ hybridization法によって突き止めた。さらに、もうひとつのD-アミノ酸含有ペプチドであるfulicinの遺伝子はparietal ganglionに特異的に発現していること、および心房にもmRNAが存在することを明らかにし、fulicinは神経ペプチドのみならず心房性ホルモン様物質としても機能している可能性を示した。現在は、achatin-Iの異性化に関与する異性化酵素のcDNAを同定すべく、pedal ganglionとその他の領域に対する高効率DD-PCR法を確立することを主目的として、研究を続行中である。

achatin-I is characterized by strong cardiac excitation at the end of N residues. The L-Phe in the D-Phe precursor of achatin-I is not identified in detail during the enzyme heterogenization process. A policy was established to clarify the general principles of heterogenization in the process of heterogenization. The possibility that alloenzymes are involved in the production of achatin-I is extremely high. For example, if the achatin-I gene is detected, the achatin-I gene is detected at a specific location. The results showed that the achatin-I cDNA library was successfully developed by RT-PCR and in situ hybridization. D-amino acid contains fulicin gene and its specific expression in parietal ganglion. The possibility of fulicin gene expression in parietal ganglion and its function is demonstrated. Now, we have established a high efficiency DD-PCR method for the identification of different enzymes in different fields, such as the pedal ganglion.

项目成果

Tsuyoshi Kawada,Honoo Satake et al.: "Characterization of a novel cDNA sequence encoding invertebrate tochykinin-related peptides isolated from the echiuvoid worm, Uvechis unicinctus"Biochem.Biophys,Res.Commun.. 263. 848-852 (1999)

Tsuyoshi Kawada、Honoo Satake 等人：“编码从 echiuvoid 蠕虫 Uvechis unicinctus 中分离的无脊椎动物急激肽相关肽的新型 cDNA 序列的表征”Biochem.Biophys，Res.Commun.. 263. 848-852 (1999)

Honoo Satake et al.: "Evidence for conservation of the vasopressin/oxytocin superfamily in Anne lida" J.Biol.Chem.274. 5605-5611 (1999)

Honoo Satake 等人：“安妮利达中加压素/催产素超家族的保护证据”J.Biol.Chem.274。

Honoo Satake et al.: "Characterization of a cDNA encoding a precursor polypeptide of a D-amino acid-containing peptide, achatin-I and localized expression of the achatin-I and fulicia genes" Eur.J.Biochem.印刷中. (1999)

Honoo Satake 等人：“编码含有 D-氨基酸的肽、achatin-I 的前体多肽的 cDNA 的表征以及 achatin-I 和 fulicia 基因的局部表达”，Eur. J. Biochem，1999 年出版。 ）

Honoo Satake et al.: "Characterization of a cDNA encoding a precursor polypeptide of a D-amino acid-containing peptide,achatin-I and localized expression of the achatin-I and fulicin gene"Eur.J.Biochem.. 261. 130-136 (1999)

Honoo Satake 等人：“编码含 D-氨基酸肽的前体多肽的 cDNA 的表征，achatin-I 以及 achatin-I 和富里菌素基因的局部表达”Eur.J.Biochem. 261. 130

Honoo Satake et al.: "Characterization of a cDNA and expression of mRNA encoding an Achatina cardioexcitatory RF amide peptide"Peptides. 20. 1295-1302 (1999)

Honoo Satake 等人：“编码 Achatina 心脏兴奋性 RF 酰胺肽的 cDNA 的表征和 mRNA 的表达”肽。