水温変化によって発現が誘導される魚類遺伝子の同定と機能解析

水温变化诱导表达的鱼类基因鉴定及功能分析

• 批准号: 10760124
• 负责人: 菊池 潔
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10760124/
• 关键词: 温度馴化; 温度適応; コイ; キンギョ; 魚類; 遺伝子; Wap 65

変温動物である魚類は,環境水温の変動に伴い体温が変わる。このような体温の変化に対して,魚類は体質を変化させて体内の恒常性を保ち生命活動を維持している。しかしながら,この体質変化の機構は全く不明のままとされている。そこで本研究は,水温変化によって起こされる魚類の体質の変化をタンパク質分子レベルおよび遺伝子レベルで明らかにすることを目的にした。1 高温で飼育したキンギョやコイでは高温馴化関連タンパク質Wap65の遺伝子発現量が顕著に増加する。本タンパク質の生化学的性状を明らかにするための第一歩として,未変性状態での単離法を確立した。体重約100gのキンギョを30℃で5週間飼育した後,血液を採取した。遠心分離後,得られた10mlの血漿から,分子量および特異抗体との反応を指標としつつ,ゲル濾過カラム,イオン交換カラムを用いたクロマトグラフィーにより,約1mgのWap65を精製した。単離されたWap65はSDS-PAGE上,単一バンドを示した。また,ゲル濾過法により分子量は65,000と同定され,本タンパク質がサブユニット構造をとらないことが示された。2 肝臓は水温変化によって引き起こされる魚類の体質の変化において,重要な働きをしている可能性が示されている。そこで,水温によって発現調節を受ける本臓器中の遺伝子を検出するため,まず,10および30℃馴化コイの肝膵臓からmRNAを単離した後,cDNAを合成した。次に,合成したcDNAを鋳型としたディファレンシャルディスプレイ法によりmRNAの発現状態を比較した。その結果,低温馴化魚特異的に発現しているcDNA断片の増幅が検出された。

The temperature of animals and fish changes, and the temperature of the environment changes. The change of body temperature in fish is related to the change of body constitution in order to maintain the stability of life activities in fish. It is not clear whether the mechanism of physical transformation is completely unknown. This study is aimed at the change of fish constitution caused by water temperature change. 1 The amount of genetic proteins detected in high-temperature feeding and breeding and in high-temperature acclimation related to natural protein Wap65 has significantly increased. The first step in the establishment of qualitative and biochemical characteristics of the organism is to establish a method of separation in the undifferentiated state. After 5 weeks of incubation at 30℃, blood samples were collected. After the separation, we got 10ml of plasma, molecular weight, specific antibody, anti-tumor index, filtration, exchange, purification, about 1mg of Wap65. A single entry was shown on SDS-PAGE for Wap65. The molecular weight is 65,000 and the structure is stable. 2. The possibility that the liver may change in response to water temperature changes is shown in the following. In this paper, the gene expression in the host is regulated by water temperature, and the cDNA is synthesized after the mRNA of the liver is isolated and acclimated to 10 ℃ and 30℃. In addition, the expression of cDNA was compared with that of mRNA. As a result, the specific expression of cDNA fragments in fish acclimated to low temperature was detected.

项目成果

K. Kikuchi et al.: "Isolation of a 65-KDa protein from white muscle of warm temperature-acclimated goldfish (Carassius auratus) ." Comp. Biochem. Physiol.B120. 385-391 (1998)

K. Kikuchi 等人：“从温暖环境的金鱼 (Carassius auratus) 的白色肌肉中分离出 65-KDa 的蛋白质。”