水温変化によって発現が誘導される魚類遺伝子の同定と機能解析

水温变化诱导表达的鱼类基因鉴定及功能分析

基本信息

批准号：
10760124
负责人：
菊池潔
金额：
$ 1.47万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10760124/
关键词：
温度馴化温度適応コイキンギョ魚類遺伝子 Wap 65

项目摘要

変温動物である魚類は,環境水温の変動に伴い体温が変わる。このような体温の変化に対して,魚類は体質を変化させて体内の恒常性を保ち生命活動を維持している。しかしながら,この体質変化の機構は全く不明のままとされている。そこで本研究は,水温変化によって起こされる魚類の体質の変化をタンパク質分子レベルおよび遺伝子レベルで明らかにすることを目的にした。1 高温で飼育したキンギョやコイでは高温馴化関連タンパク質Wap65の遺伝子発現量が顕著に増加する。本タンパク質の生化学的性状を明らかにするための第一歩として,未変性状態での単離法を確立した。体重約100gのキンギョを30℃で5週間飼育した後,血液を採取した。遠心分離後,得られた10mlの血漿から,分子量および特異抗体との反応を指標としつつ,ゲル濾過カラム,イオン交換カラムを用いたクロマトグラフィーにより,約1mgのWap65を精製した。単離されたWap65はSDS-PAGE上,単一バンドを示した。また,ゲル濾過法により分子量は65,000と同定され,本タンパク質がサブユニット構造をとらないことが示された。2 肝臓は水温変化によって引き起こされる魚類の体質の変化において,重要な働きをしている可能性が示されている。そこで,水温によって発現調節を受ける本臓器中の遺伝子を検出するため,まず,10および30℃馴化コイの肝膵臓からmRNAを単離した後,cDNAを合成した。次に,合成したcDNAを鋳型としたディファレンシャルディスプレイ法によりmRNAの発現状態を比較した。その結果,低温馴化魚特異的に発現しているcDNA断片の増幅が検出された。

鱼是异质动物的，其体温随着环境水的温度的变化而变化。为了应对体温的这种变化，鱼类改变其体质以维持体内体内的稳态并维持生活活动。但是，这种宪法变化的机制仍然是完全未知的。因此，这项研究旨在阐明由蛋白质分子和基因水平下水温变化引起的鱼类构成的变化。 1。在高温下升高的金鱼和鲤鱼中，高温适应相关蛋白WAP65的基因表达水平显着增加。作为阐明该蛋白质的生化特性的第一步，建立了一种天然状态的隔离方法。将重约100克的棉花糖在30°C保持5周，并收集血液。离心后，使用分子量和与特定抗体作为指示器的特定抗体反应，使用凝胶过滤柱和离子交换柱从获得的10 ml血浆中纯化了约1 mg的WAP65。孤立的WAP65在SDS-PAGE上显示单个频带。此外，通过凝胶过滤将分子量鉴定为65,000，表明该蛋白质没有亚基结构。 2已经表明，肝脏可能在水温变化引起的鱼类构成中起重要作用。因此，为了检测受水温调节的器官中的基因，首先在10和30°C下从条件鲤鱼中的鲤鱼的肝癌中分离mRNA，然后合成cDNA。接下来，使用合成的cDNA作为模板比较mRNA表达状态。结果，检测到在冷条件鱼中特异性表达的cDNA片段的扩增。