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筋収縮による衛星細胞の活性化機構

肌肉收缩激活卫星细胞的机制

基本信息

批准号：
10760186
负责人：
辰巳隆一
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

初年度は、衛星細胞がヘパサイトグロースファクター(HGF)を自ら合成しているかどうかを調べた。得られた成果の概要は以下の通りである。1)ラットHGFの塩基配列に基づきプライマーを作製しRT-PCR法によりHGFのmRNAの発現を調べたところ、培養時間の経過に伴い発現量は増加し42時間目にほぼ最大になることが分った。2)衛星細胞および培養上清を抗HGF抗体を用いたECL-Western Blottingに供試したところ分子量約9万および6万の位置に強い反応が認められ、衛星細胞がHGFを合成・分泌していることがタンパク質レベルでも確認された。またHGFの合成量は培養48時間目にほぼ最大となり、これは先のmRNAの発現量の変化と良く対応していた。3)衛星細胞が合成・分泌したHGFに衛星細胞を活性化する生理活性があるかどうかを抗HGF抗体を用いた中和実験により調べた。即ち、充分量の抗HGF抗体を添加した培養液を用いて衛星細胞を培養し、活性化に及ぼす抗HGF抗体の影響を追究した。抗HGF抗体を添加していない対照区においては培養42時間目以降に活性化率が急激に増加したのに対して、抗HGF抗体添加区では活性化率は低く推移したことから、衛星細胞が分泌したHGFは生理活性を有していることが確認された。以上の結果は、衛星細胞はHGFを自ら合成・分泌することを示しており、autocrineによって活性化を誘起するものと考えられた。また、HGFの合成がまだ盛んでない培養初期の衛星細胞において、細胞膜周辺に既に多量のHGFが存在していることを間接蛍光抗体法により観察しており、分泌されたHGFが細胞膜や細胞外マトリックスに結合・貯蔵されている可能性が示唆された。

In the early years, satellite cells were used to synthesize and modify the DNA. The following is a summary of the results obtained. 1) HGF gene alignment, gene expression, RT-PCR method, HGF mRNA expression, culture time, and the amount of HGF mRNA expression increased by 42 minutes. 2)ECL-Western Blotting of satellite cells and culture supernatant for anti-HGF antibodies was used to test the molecular weight of HGF at about 90,000 to 60,000 positions, and to confirm the synthesis and secretion of HGF by satellite cells. The amount of HGF synthesized was the highest at 48 hours of culture, while the amount of mRNA produced was the highest at 48 hours of culture. 3)Satellite cells synthesize and secrete HGF and activate HGF. That is, sufficient amounts of anti-HGF antibodies were added to the culture medium to investigate the effects of satellite cell culture, activation and anti-HGF antibodies. Anti-HGF antibody was added to the culture medium for 42 hours, and the activation rate increased rapidly. The results showed that HGF was synthesized and secreted by satellite cells. The synthesis of HGF was observed in satellite cells at the early stage of culture, and the existence of a large amount of HGF in the periphery of the cell membrane was demonstrated by indirect light antibody method.