マウスPre-Bリンパ腫DNAにおけるレトロウイルス挿入部位の解析と発病機構

小鼠Pre-B淋巴瘤DNA逆转录病毒插入位点分析及致病机制

• 批准号: 10770095
• 负责人: 阿不江 パタール
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770095/
• 关键词: SL; Khマウス; Pre-Bリンパ腫; 内在性レトロウィルス; プロウィルス; Inrerse PCR; 癌遺伝子

SL/Khマウスは当教室で育成したPre-Bリンパ腫を高率に自然発生するモデル系で、その発病には内在性レトロウイルスと宿主の遺伝的背景の組み合わせが重要である。SL/Khの自然発生Pre-Bリンパ腫症例を多数集め、制限酵素で切断したそのDNAについて内在性Ecotropic MuLVのenvをプローブとしてサザン解析を行い、ウイルスゲノムのクローナルな新挿入を検出し、そのサイズから共通挿入部位があることが示唆された。ついでサザン法で共通挿入部位と思われるバンドが集中しているゲル位置からDNAを抽出して、これをテンプレートとし、ウイルスゲノム内部に適当なプライマーを設定してInversePCR法にてウイルス・宿主ジャンクションを含む産物を得た。このうち、germline DNAから類似の産物が増幅された場合には内在性ウイルス・宿主ジャンクションの可能性があるので捨てた。新挿入部位ジャンクションと思われる産物については制限酵素地図を作成し、ウイルスゲノム部分を推定し、これを切り落とした。これで得られた断片を宿主側フランキングシーケンスとした。この断片をプローブとしてリンパ腫DNAのサザン解析をおこなった。genomicDNAと比較し、組み換えを認めた断片の塩基配列の決定と、その断片をプローブとしてFISH法にて染色体位置を決定することを次のステップとして実行中である。染色体位置から既知の癌遺伝子を探索する。近傍に既知の癌遺伝子がない場合にはゲノミックライブラリーからこの配列を含む宿主配列をウオークしウイルス挿入により活性化される遺伝子を探す。この研究について阿不江は平成10年10月より留学のため休職になったので、後任の鶴山助手が継続している。

SL/KhマウスはWhen the classroom is raised, Pre-B リンパをHigh-rate natural 発生するモデル systemで, その発 Disease には internal nature レトロウイ ルスとhost の缝’s background のgroup み合わせがimportant である. SL/Kh's natural disease Pre-B リンパ syndrome cases を majority set め, restriction enzyme で cutting し た そ の DNA に つ い て intrinsic Ecotropic MuLVのenvをプローブとしてサザンanalyticsを行い、ウイルスゲノムのクローNana's newly inserted を検出し and そのサイズから have a common insertion site of があることが时憆された.ついでサザン法でCOMMON INSERTION PARTSと思われるバンドが CONCENTRATIONしているゲル Position からDNAをExtract して、これをテンプレートとし、ウThe inverse PCR method of the inverse PCR method and the host ジャンクションをcontaining product are obtained.このうち、germline DNAからsimilar productがincrease widthされたoccasionにはinternalityウイルス・hostジャンクションのpossibilityがあるので屋てた. The new insertion site of the new insertion site is the enzyme restriction enzyme site.図を成し, ウイルスゲノムpart of it is presumed, and これをcutりdropsとした.これで got the られた fragment を the host side フランキングシーケンスとした.この片をプローブとしてリンパ swellingDNAのサザンanalyticsをおこなった. GenomicDNA comparison, group replacement, recognition, fragmentation, and base alignment determination, and fragmentation The ローブとしてFISH method is used to determine the position of the chromosome and is used to determine the location of the chromosome. The location of the chromosome is not known and the cancer remains are not yet explored. It's a known cancer survivor in the near future.をContains the host arrangement をウオークしウイルス inserts the によりactivationされる伝子をExplorer. In October 2010, he took a leave of absence from his post as a study abroad student and was appointed as assistant to Tsuruyama.

项目成果

Hiai H.: "Genetic and epigenetic Susceptibility to endogenous retrovirus-induced lymphomas in SL mice." In Progress in Experimental Tumor Research Vol.37 Animal Modela of Cancer Predisposition Syndrome's, (in press)

Hiai H.：“SL 小鼠对内源性逆转录病毒诱导的淋巴瘤的遗传和表观遗传易感性。”