心筋細胞再生を目指した基礎的研究

旨在再生心肌细胞的基础研究

• 批准号: 10770321
• 负责人: 竹下 晃子
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770321/
• 关键词: 骨髄; 心筋細胞; 表現型; 発生; 細胞分化; 分化

(1)骨髄間質細胞より心筋細胞への分化誘導法の確立:骨髄間質細胞は分化誘導前には線維芽細胞様の形態を呈した。分化誘導後には多くのクローンは骨芽細胞や脂肪細胞に分化したが、ごく少数の細胞が自己拍動を開始した。このクローンを単離し、CMG細胞とした。分化誘導後2週頃より自己拍動を開始した。その後CMG細胞は形態的に他の細胞より肥大し、方向性を有し近接する細胞と縦列して接着し、筋管細胞を形成した。CMG筋管細胞は骨格筋の筋管細胞と異なり、分枝により他の筋管細胞と接合し、蜘蛛の巣状の外観を呈した。(2)収縮蛋白のisoform解析によるCMGさいぼうの心筋としての表現型の解析:心筋収縮蛋白であるアクチン、ミオシン軽鎖、ミオシン重鎖等には胎児型、成獣型、心房筋型、心室筋型などのisoformが存在する。CMG細胞の収縮蛋白のisoformは表に示す如く、胎児型心室筋型を示した。さらに、CMG細胞では分化後にNa利尿ペプチドANP、BNP発現が観察された。(3)心筋特異的転写因子の発現:心筋に分化したCMG細胞では心筋特異的転写因子としてNkx2.5、GATA4、MEF-2A、MEF-2C、MEF-2D、TEF-1、遺伝子の発現が観察された。初代培養した骨髄間質細胞ではこれらの発現は認めないが、CMG細胞では最終分化前に既にNkx2.5、GATA4、MEF-2C、TEF-1の発現が見られ、最終分化誘導後に遅れてMEF-2A、MEF-2Dの発現が観察された。in vivoの発生過程のこれら転写因子の発現時期に関しても同様な順序で発現するが、CMG細胞の最終分化も同様な過程で進行することを明らかにした。分化前の段階のCMG細胞は未分化な中胚葉系幹細胞から心筋芽細胞により分化した状態にあり、分化後には胎児型心室筋の状態になることが解明された。

(1) The differentiation induction method of bone marrow interstitial cells and cardiomyocytes is established: before the differentiation induction of bone marrow mesenchymal cells, the morphology of line fibroblasts will be the same. After induction of differentiation, many bone bud cells and adipocytes are differentiated, and a small number of cells start to beat by themselves.このクローンを単里し, CMG cell とした. Two weeks after induction of differentiation, I began to pat myself. The morphology of post-CMG cells is that the cells are enlarged, the cells are close to each other in the direction, the cells are in rows, and the myotubular cells are formed. CMG muscle tube cells are different from each other, branched muscle tube cells are joined together, and spider-like muscle tube cells are formed from each other. (2) Analysis of the isoform of the contractile protein: Analysis of the phenotype of the contractile protein: CMG's contractile protein There are チン, ミオシン軽 lock, ミオシン绽 lock and other types of fetal type, adult type, atrial muscle type, ventricular muscle type and other isoforms. The isoform of contractile protein in CMG cells is expressed as such, and the fetal type ventricular muscle type is expressed as such. After differentiation of さらに and CMG cells, にNa is diuretic and ANP and BNP are detected. (3) The expression of cardiomyocyte-specific transcription factor: cardiomyocyte differentiation of CMG cells and cardiomyocyte-specific expression factor Nkx2. 5. GATA4, MEF-2A, MEF-2C, MEF-2D, TEF-1, and the remaining ones. Primary culture of bone marrow mesenchymal cells and CMG cells before final differentiation. Nkx2.5 and GATA4 , MEF-2C, TEF-1's appearance, MEF-2A, MEF-2D's appearance after induction of terminal differentiation. in Vivo’s production process and factors are written in The process of final differentiation of CMG cells and CMG cells is not carried out at the same time. The CMG cells in the pre-differentiation stage, the undifferentiated mesodermal stem cells, the myocardial bud cells, the differentiated state, and the post-differentiation state of fetal ventricular myocardium are explained in detail.

项目成果

Kaori Shinagawa,Hideo Mitamura,Akiko Takeshita: "Determiration of Refractory Periods and Conduction Velocity During Atrial Fibrillation Using Atrial Capture in Dogs"Journal of the American College of Cardiology. 35. 246-253 (2000)

Kaori Shinakawa、Hideo Mitamura、Akiko Takeshita：“使用狗的心房夺获来确定心房颤动期间的不应期和传导速度”美国心脏病学会杂志。