Yeast two-hybrid法による嚢胞腎起因蛋白に相互作用を有する蛋白解析

使用酵母双杂交方法分析与囊性肾相关蛋白相互作用的蛋白质

• 批准号: 10770536
• 负责人: 高橋 真生
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770536/
• 关键词: 嚢胞腎; 結合蛋白; ポリチスチン; 酵母

ヒトにおける腎の形態形成異常で最も重要な意義を持つと考えられる多発性嚢胞腎の責任遺伝子の決定が相次いで行われた。PKD1遺伝子の遺伝子産物、polycystin1は、そのN末端は細胞外に、C末端は細胞内に存在し、7〜11個の膜貫通ドメインをもつ膜蛋白である。細胞外にある大きな領域には、他の淡白と相同性のある特異的なドメインが並んでおり、それに続いて膜貫通ドメイン、細胞内ではcoiled to coilドメインなどが存在する。一方、PKD2遺伝子の遺伝子産物(polycystin2)は、N末端、C末端ともに細胞内に存在し、その間に6個の膜貫通ドメインをもつ蛋白である。遺伝子レベルでは、polycystin1と2の間にcoiled to coilの領域が存在し相互作用をおよぼす可能性が指摘されている。この点からも両蛋白の何らかの共発現が期待されるが、我々は、ヒト腎組織で両蛋白の存在を二重染色によって確認した。さらにこの両者が共同して"PKD pathway"を形成することが推測されている。遺伝子構造でcoiled to coilドメインの存在は両者がbinding partnerとして働く可能性示唆している。このためpolycystin1の細胞内ドメインとpolycystin2を挿入したベクターを用いたhybridiztionを行い、両者が相互に結合しあうことが観察された。さらに、polycystin1およびpolycystin2それぞれに対するbinding partnerの候補を5個以内に絞り込んだ。polycystin1はやはり蛋白自体が巨大であり、発現ベクターのconstructが非常に困難で、分割したクローンを作製せざるを得なかった。陽性クローンのsubcloningを行い、nucleotideのシークエンスを行っている状況である。

The most important significance of abnormal kidney morphology is to study the role of multiple cellular kidney in determining the genetic status of the kidney. PKD1 gene product, polycystin1, N-terminal extracellular, C-terminal intracellular, 7 ~ 11 membrane penetration Extracellular large areas, other light white, identical, specific areas, coiled-to-coil areas, intracellular areas One protein, PKD2 protein and its derivative product (polycystin2) are present in the cell at the N, C terminal and 6 membrane passages. The domain between polycystin1 and polycystin 2 is coiled to coil, and the possibility of interaction between polycystin 1 and polycystin 2 is suspected. The presence of protein in kidney tissue was confirmed by double staining. The PKD pathway was formed in the same way as the PKD pathway. The structure of the coil is coiled to the coil, and the binding partner and the possibility of the coil are indicated. Polycystin1 and polycystin2 are incorporated into each other by hybridization. Polystatin 1 and polystatin 2 are candidates for binding partners within 5 times. Polycystin1 is very difficult to construct and partition. The subcloning of the nucleotide is in progress.