ヒト軟骨芽細胞様細胞におけるNF-kBの発現とアポトーシスとの関係

人成软骨样细胞NF-kB表达与凋亡的关系

• 批准号: 12771238
• 负责人: 堀口 英之
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12771238/
• 关键词: Apoptosis; NF-kB; 軟骨細胞

1:免疫組織化学染色法によるアポトーシス発現:ヒト軟骨芽細胞様細胞(USAC)を抗癌剤(スタウロスポリン)、アポトーシス誘導剤、NF-kB阻害剤(CAPE)で24,48,72,96時間処理し、免疫組織化学染色法で染色したところ、経時的にNF-kBのサブユニットであるp65およびp50の発現上昇が認められたが、アポトーシス誘導剤、NF-kB阻害剤で処理した場合に比べて抗癌剤で処理した場合の方がp65およびp50の発現は高かった。これはTUNEL法による染色結果と一致していた。2:ウエスタンブロット法による細胞内のNF-kBサブユニット(p65、p50)の発現:同様にUSACを抗癌剤、アポトーシス誘導剤で24,48,72,96時間処理したのち、細胞質抽出タンパク質(NE:Nuclear Extracts)、核抽出タンパク質(CE:Cytoplasmic Extracts)中のp65、およびp50の発現をウエスタンブロット法で検索したところ、経時的にNE中のNF-kBの増加が認められた。NF-kBは2つのsubunit(p65、p50)にl-kBが結合し、不活性型として細胞質中に存在しているが、抗癌剤など、細胞をアポトーシスに誘導する刺激が細胞外から与えられると、阻害的因子l-kBが遊離し活性型のNF-kBとなり、核内に移行する。ウエスタン法により、核内(NE)においてNF-kBのサブユニットであるp65とp50の発現上昇が認められたのは、抗癌剤、アポトーシス誘導剤などの細胞外刺激によりNF-kBが活性化し、核内に移行したためと思われる。一方、細胞質中には活性型のNF-kBが少ないので、CEではsubunitの発現上昇があまり認められなかった。これらよりヒト軟骨細胞様細胞でもNF-kBはanti-Apoptosisとして働くことが分かる。

1: Immunohistochemical staining method: chondroblast cell (USAC) anti-cancer agent (including anti-tumor agent), anti-tumor inducer, NF-kB inhibitor (CAPE) 24,48,72,96 time treatment, immunohistochemical staining method, NF-kB anti-tumor agent, NF-kB inhibitor, p65, p50, p65, p65, p50, p65, p65, p The TUNEL staining results were consistent. 2: The development of NF-kB in cells under the "" method: In the same way, the development of NF-kB in cells under the "" method increased with the increase of p65 and p50 in USAC, anticancer agent, and allotropic inducer under 24, 48, 72, and 96 time treatments, cytoplasmic extracts (NE:Nuclear Extracts), and nuclear extracts (CE:Cytoplasmic Extracts). NF-kB binds to two subunits (p65, p50), inactive forms exist in cytoplasm, anticancer agents, cellular responses induce stimulation, extracellular responses, inhibitory factors, free and active forms of NF-kB, and nuclear migration. The expression of p65 and p50 in NF-kB mRNA and protein was detected by DNA sequencing, intracellular (NE) migration, and extracellular stimulation. A small amount of NF-kB in the cytoplasm and a small amount of CE in the cytoplasm are present. The NF-kB anti-Apoptosis and anti-Apoptosis of chondrocytes are closely related.