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ヒトがん細胞におけるMAPキナーゼ系の異常

人类癌细胞中 MAP 激酶系统的异常

基本信息

批准号：
12771405
负责人：
星野理香
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12771405/
关键词：
MAPキナーゼヒト癌細胞細胞接着細胞骨格転移浸潤

项目摘要

本年度はヒト癌細胞がMAPキナーゼのパターンによって3種類に分類されることの生物学的意義を、特に「細胞接着性」及び「細胞骨格系」の制御との関連に注目し、具体的には3種類に分類された癌細胞におけるインテグリン/Focal Adhesion Kinase(FAK)系、さらにRhoファミリー蛋白質の変動に焦点を当てて解析を進め、以下の結果を得た。1.各癌細胞において、インテグリンβ1の量的変化をフローサイトメトリーおよび蛍光抗体法で、さらにFAKの機能変化についてはWestern Blot法および蛍光抗体法を用い、そのリン酸化の程度を指標として解析したところ、MAPキナーゼが恒常的に活性化されている癌細胞群においてはインテグリンβ1の発現量が有意に上昇しており、このとき同時にFAKもリン酸化(活性化)されていることが明らかとなった。一方増殖刺激時でさえMAPキナーゼの活性化が全く誘導されない癌細胞群においては、インテグリンβ1はほとんど発現しておらず、またFAKのリン酸化も起こっていないことを確認した。これらのことよりMAPキナーゼがヒト癌細胞において、FAK/インテグリン系を介した細胞接着性の制御に深く関与している可能性が示唆された。現在は各癌細胞の血管内皮細胞、あるいは種々の細胞外マトリックス成分への接着性等について解析中である。2.アクチン細胞骨格形成において重要な役割を果たしているRhoA蛋白質の発現量を蛍光抗体法およびWestern Blot法でしらべたところ、増殖刺激に対してMAPキナーゼの活性化が全く誘導されない癌細胞群においては、RhoA蛋白質の発現量が有意に低下しており、一方MAPキナーゼが恒常的に活性化されている癌細胞群においてはRhoA蛋白質の発現量が一定レベルを上回っている傾向を認めた。次にこれらMAPキナーゼが恒常的に活性化されている癌細胞をMEK阻害剤PD98059で処理してMAPキナーゼ系を遮断したところ、その増殖はほぼ完全に抑制され、劇的な細胞形態変化が引き起こされ、このときアクチンストレスファイバーが消失しているのが観察された。さらにこのとき顕著なG1期停止が起こっており、CDKインヒビターの一種であるP27Kip1の発現が顕著に上昇していることを見出した。最近RhoAがP27Kip1の分解制御に関わっているとの報告もあることから、RhoAとMAPキナーゼ、およびP27Kip1との間に何らかの相関関係があるのではないかとみて、現在RhoAの活性型および不活性型遺伝子を導入した際の各癌細胞におけるMAPキナーゼ、あるいはP27Kip1の挙動についてさらに詳しい解析を進めている。

This year, the biological significance of three types of classification of cancer cells, especially the relationship between "cell adhesion" and "cell skeleton system", the specific three types of classification of cancer cells, such as "cell adhesion"/Focal Adhesion Kinase(FAK) system, and the focus of Rho protein movement were analyzed. The following results were obtained. 1. Changes in the amount of β1 in each cancer cell population include changes in the amount of β1 in each cancer cell population, changes in the This is the first time I've ever been to a hospital. When one side of the proliferation stimulation, MAP is activated, and the whole cancer cell population is induced. The relationship between FAK and cell adhesion and the possibility of cell adhesion is discussed. Now we analyze the vascular endothelial cells of various cancer cells, the extracellular components and the adhesion. 2. RhoA protein production by light antibody assay and Western Blot assay is important for cell skeleton formation, but the production of RhoA protein is intentionally decreased by the increase of MAP activity and the induction of whole cell population. The expression of RhoA protein in cancer cell populations was observed to be consistent with MAP activity. In addition, MEK inhibitor PD98059 can inhibit the proliferation of MAPs, inhibit the proliferation of MAPs, and completely inhibit the morphological changes of MAPs. The first phase of CDK1 is now in progress. The second phase is in progress. Recently, RhoA and P27 Kip1 have been reported to be related to the decomposition and control of RhoA and MAP, and the relationship between RhoA and MAP and P27 Kip1 has been analyzed in detail.