sec遺伝子による新たなシナプス伝達制御機構の解明

阐明 sec 基因的新突触传递控制机制

• 批准号: 12780581
• 负责人: 原田 真市
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12780581/
• 关键词: sec10; sec15; sec5; Exo70; Caenorhabditis elegans

新たなシナプス伝達機構の探索を目的として、小胞の形質膜結合に関与すると推定されるSec関連遺伝子の線虫ホモログ、Sec10, 15, 5及びExo70遺伝子をクローン化した。RT-PCR及びC. eleg ans cDNAライブラリーからSec10 cDNAは1,980bp、Sec5 cDNAは2,660bp、Exo70 cDNAは1,900bpのほぼ全長のcDNAクローンを得た。Sec15 mRNAはノーザンブロット解析から5.3, 3.8, 2.9, 1.7と1.1kbの少なくとも5つが確認されたが、スクリーニングの結果3'領域の異なるクローンがこれまでに11種存在することを突き止めた。これらはAからGのグループに分類された。しかしながら、5.3kbに相当するcDNAクローンは得られていないため、5'及び3'RACE法によるクローニングを試みている。Sec関連遺伝子の発現を調べるため、プロモーター領域を含むそれぞれのゲノムDNA断片をGFPをレポーター遺伝子として持つ発現ベクターに組み込み、マイクロインジェクションにより導入し、トランスジェニック線虫で遺伝子局在を調べた。いずれのSec関連遺伝子共に神経系と腸に局在が見られた。特に、神経系ではmotor neuronと一部の頭部神経細胞で発現が見られ、これら遺伝子は神経特異的なunc-18, unc-64遺伝子の局在と極めて類似していた。このことからSec関連遺伝子はシナプス前終末で機能していると推定され、シナプス小胞の分泌に深く関わっていると示唆された。さらに、これら遺伝子の機能を調べるため無細胞系タンパク質発現系によりSEC10とUNC-18タンパク質を発現させ、結合能を調べた。弱いながらも両者は結合したことから、SEC10はシナプス前終末で機能し、UNC-18を介したシナプス伝達機構に関連すると考えられた。

The aim of this study is to explore the mechanism of cell membrane binding, and to estimate the relationship between Sec and Exo genes. RT-PCR and C. eleg ans cDNA sequence 1,980bp, Sec5 cDNA sequence 2, 660bp, Exo70 cDNA sequence 1, 900bp, Sec10 cDNA sequence 1,980bp, Sec5 cDNA sequence 2,660bp, Exo70 cDNA sequence 1,900bp, Sec10 cDNA sequence 1,980bp, Sec5 cDNA sequence 2,660bp, Exo70 cDNA sequence 3, 900bp, Sec10 cDNA sequence 4, 900bp, Sec10 cDNA sequence 4,900bp, Exo70 cDNA sequence 4,900bp, Sec10 cDNA sequence 4, 9000bp, Sec10 cDNA sequence 4, 9000bp, Sec10 cDNA sequence 5 cDNA sequence 4, 9000bp, Exo70 cDNA sequence 4 cDNA sequence 4, 9000 Sec15 mRNA was analyzed from 5.3, 3.8, 2.9, 1.7 to 1.1 kb and identified as a result of 11 species in the 3'domain. A. A. G. A. G. G. The 5.3kb cDNA library was developed using the 5'-and 3'-RACE methods. The expression of Sec related genes is regulated by the following factors: DNA fragments, GFP, DNA fragments, DNA In the middle of the night, there was a lot of noise. In particular, a part of the nervous system motor neuron is found in the brain cells, and the unc-18, unc-64 genes are found in the brain cells. The function of the related gene is estimated, and the secretion of the related gene is deeply related. In addition, the function of the gene is modulated, and the cell-free system is modulated. The SEC10 and UNC-18 are modulated. The SEC10 has the function of connecting to the UNC-18. The SEC10 has the function of connecting to the UNC-18.

项目成果

Tomokazu Miyakawa et al.: "Exposure of Caenorhabditis elegans to Extremely Low Frequency High Magnetic Fields Induces Stress Responses"Bioelectromagnetics. 22. 1-7 (2001)

Tomokazu Miyakawa 等人：“秀丽隐杆线虫暴露于极低频高磁场会诱发应激反应”生物电磁学。

Shin-ichi Harada et al.: "Effects of High ELF Magnetic Fields on Enzyme-Catalyzed DNA and RNA Synthesis in vitro and on a Cell-Free DNA Mismatch Repair"Bioelectromagnetics. 21. 1-7 (2001)

Shin-ichi Harada 等人：“高 ELF 磁场对体外酶催化 DNA 和 RNA 合成以及无细胞 DNA 错配修复的影响”生物电磁学。

Harada, S et al.: "Effects of High ELF Magnetic Fields on Enzyme-Catalyzed DNA and RNA Synthesis in vitro on a Cell-Free DNA Mismatch Repair"Bioelectromagnetics. 22(4). 260-266 (2001)

Harada, S 等人：“高 ELF 磁场对无细胞 DNA 错配修复体外酶催化 DNA 和 RNA 合成的影响”生物电磁学。

石森隆行 等: "交流磁会暴露による線虫C. elegans hsp-16遺伝子への影響"日本応用磁気学会誌. 251159-251161 (2001)

Takayuki Ishimori 等人：“接触交流磁场对线虫 hsp-16 基因的影响”日本应用磁学学会杂志 251159-251161 (2001)。

Yokoyama, K et al.: "Extension of life span of Caenorhabditis elegans by over-expression of Hsp70"FEBS Letters. (2002)

Yokoyama, K 等人：“通过 Hsp70 的过度表达延长秀丽隐杆线虫的寿命”FEBS Letters。