Exocyst複合体を介した新たなシナプス伝達制御機構の解明

阐明 Exocyst 复合体介导的新突触传递控制机制

• 批准号: 14780579
• 负责人: 原田 真市
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14780579/
• 关键词: C.elegans; Exocyst; Exo70; Sec5; Sec10; Sec15; C. elegans

新たなシナプス伝達機構の解明を目的として、小胞の形質膜結合に関与すると推定されるExocyst複合体に注目し関連遺伝子の線虫ホモログ、Sec5,10,15及びExo70遺伝子のクローン化を行った。その結果を基に、発生段階におけるそれぞれの遺伝子転写産物の定量的PCRによる遺伝子発現レベルの検討を行った。Sec5,10及びExo70遺伝子の発現はEmbryo期で最も高く、ステージ移行とともに減少していた。このことは神経系の発生にもこれら遺伝子が関与すると推測される。Sec15遺伝子は、今回、新たに1種の転写産物の存在が明らかになり、これまでに6種が判明している。基本となるcDNAは24個のエキソンからなるが、その他の転写産物はオルターネイティブスプライシングよりなっていた。いずれの転写産物もエキソンが短いことからPCRの性質上定量的解析にはいたっていない。しかし、この遺伝子は神経系と腸に発現することから分泌系に機能していることは確実である。クローン化したSec3,Sec5,Sec10,Sec15,Exo70,Exo84遺伝子cDNAをHis-tag又はGST-tagを有するタンパク発現ベクターに組込み、大腸菌内で大量発現させた。発現させたタンパク質をGlutathion Sepharoseカラム或いはNi^<2+>カラムを用いて精製を試みたが、ほとんどのタンパク質は不溶性であったことから、さらに可溶性のタグを持つベクターにサブクローニングし、発現、精製を行った。精製を行ったSEC10とUNC-18との結合実験からSEC10はUNC-18と相互作用することが判明した。これによりSEC10は神経伝達物質の放出に関与すると考えられた。

The molecular structure of the new Exocyst complex was analyzed and analyzed. The molecular structure of the Exocyst complex was estimated to be related to the molecular structure of the Exocyst complex, Sec5,10,15 and Exo70. The results of PCR were analyzed for quantitative detection of the gene expression products. Sec5,10 and Exo70 are the highest in Embryo, and the highest in migration. The development of the nervous system is related to the development of the nervous system. Sec15: The existence of one kind of writing product is clear, and six kinds are clear. The base cDNA contains 24 genes. The quantitative analysis of PCR in nature was carried out by using the PCR product as a template. The secretion system functions in the brain and intestine. Sec3, Sec5, Sec10, Sec15, Exo70, Exo84 gene cDNA His-tag and GST-tag were found in large quantities in E. coli. Discovering the substance of Glutathion Sepharose or Ni^<2+> is used to refine the substance of Glutathion Sepharose or Ni^<2+>. Discovering the soluble substance of Glutathion Sepharose is used to refine the substance of Glutathion Sepharose or Ni ^<2 +>. SEC 10 and UNC-18 interact with each other. The SEC10 is responsible for the release of substances.

项目成果

Yokoyama, K., et al.: "Extended longevity of Caenorhabditis elegans by knocking in extra copies of hsp70F, a homolog of mot-2 (mortalin)/mthsp70/Grp75"FEBS Lett.. 516(1-3). 53-57 (2002)

Yokoyama, K. 等人：“通过敲入 hsp70F（mot-2 (mortalin)/mthsp70/Grp75 的同源物）的额外拷贝来延长秀丽隐杆线虫的寿命”FEBS Lett.. 516(1-3)。

上野照剛, 重光 司, 岩坂正和編: "生体と電磁界"学会出版センター. 342 (2003)

Terutake Ueno、Tsukasa Shigemitsu 和 Masakazu Iwasaka（编）：“生物学和电磁场”协会出版中心 342（2003 年）。

池田 隆 等: "低周波交流磁界に応答する遺伝子の同定"日本応用磁気学会誌. 27. 447-451 (2003)

Takashi Ikeda 等人：“低频交变磁场响应基因的识别”日本应用磁学学会杂志 27. 447-451 (2003)。

山田外史 等: "生体と電磁界(上野照剛、重光 司、岩坂正和 編)"学会出版センター. 342 (2003)

Gaishi Yamada 等：“生物体和电磁场（上野照武、重光司和岩坂正和编辑）”学会出版中心 342（2003 年）。

Funaki, H., et al.: "Expression of Vascular Endothelial Growth Factor-D is Associated with Lymph Node metastasis in Human Colorectal Carcinoma"Oncology. (2003)

Funaki, H.等人：“血管内皮生长因子-D 的表达与人结直肠癌中的淋巴结转移相关”肿瘤学。