テロメラーゼ活性より検出した末梢血中腫瘍細胞の遺伝子解析

端粒酶活性检测外周血肿瘤细胞基因分析

• 批准号: 16H00682
• 负责人: 松本 多圭夫
• 金额: $ 0.36万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16H00682/
• 关键词: 末梢血中腫瘍細胞; GFP発現テロメラーゼ特異的増殖型アデノウィルス; 上皮間葉転換

【研究目的】近年、末梢血中腫瘍細胞(Circulating Tumor Cells ; CTC)は様々な固形癌における予後マーカーとして重要視されている。現在、上皮マーカー依存的検出法が最も広く使用されているが、腫瘍細胞が血管内へ浸潤する際に上皮間葉転換を起こすことにより、上皮マーカーの発現が減少するという報告も散見される。そこで我々は、癌細胞の不死化に必要とされるテロメラーゼに着目し、テロメラーゼ活性化細胞でのみ増殖能をもつGFP発現制限増殖型アデノウィルスを用いた新たな検出法を確立した(Takakura M et al. Br J Cancer. 107 : 448-54, 2012)。本研究では検出されたCTCを回収し、CTCの遺伝子解析を行うと同時に、上皮マーカーの発現についても検討した。【研究方法】インフォームド・コンセントのもとに得られた婦人科癌患者の末梢血5mlを溶血処理し、GFP発現制限増殖型アデノウィルスを感染させた。サイトケラチン(CK)等による免疫染色を追加し、GFP陽性細胞を蛍光顕微鏡下に回収した。検出したCTCが腫瘍由来であることを確認するため、子宮頸癌ではHPV DNAを、子宮体癌や卵巣癌ではp53、KRAS、PTEN等の変異を有する可能性が高い遺伝子をターゲットとし、解析した。まず原発病変の凍結標本からDNA抽出し、目的領域をPCR増幅後、direct sequencingにて遺伝子変異を特定した。ついでCTCのゲノムDNAをWhole genome amplification法にて増幅し、同じ遺伝子変異が存在することを確認した。【研究成果】婦人科癌症例45例中CTC陽性例は9例(20%)だった。癌種別では子宮頸癌6例、子宮体癌1例、卵巣癌2例だった。検出したCTC数は計25個で、すべてがCK陰性であった。子宮頸癌6例中5例(83%)のCTCで原発巣と一致したHPVゲノム増幅を認め、卵巣癌2例中1例(50%)のCTCで原発巣と一致したp53遺伝子における点突然変異を認めた。

【 Research Objective 】 In recent years, <s:1> type 々な solid carcinoma における in peripheral blood with Circulating Tumor Cells (CTCS) has become an important tumor in the later stage, with <s:1> カ カ と て て て. Now, epithelial マ ー カ ー dependent 検 method が 'most も hiroo く use さ れ て い る が intravascular へ が, swollen sores cell infiltrate す る interstate に epithelial mesenchymal planning in を こ す こ と に よ り, epithelial マ ー カ ー の 発 が now reduce す る と い う report も shi kan さ れ る. そ こ で I 々 は, Cancer cells の undead に necessary と さ れ る テ ロ メ ラ ー ゼ に mesh し, テ ロ メ ラ ー ゼ activation cell で の み rights can yield を も つ GFP 発 limitations now raised type ア デ ノ ウ ィ ル ス を with い た new た な を 検 out the method to establish し た (Takakura M et al. Br J Cancer, 107 : 448-54, 2012. This study で は 検 out さ れ た CTC を back 収 し, CTC の heritage 伝 child line analytical を う と に, epithelial マ ー カ ー の 発 now に つ い て も beg し 検 た. 【 methods 】 イ ン フ ォ ー ム ド · コ ン セ ン ト の も と に have ら れ た woman section 5 ml の carcinoma patients peripheral blood を hemolysis 処 し, GFP 発 limitations now raised type ア デ ノ ウ ィ ル ス を infection さ せ た. Youdaoplaceholder0, トケラチ, トケラチ (CK), etc. による immunostaining を, additional <s:1>, GFP-positive cells を蛍, light 顕 micromicroscope に recapturing た. 検 out し た CTC が swollen sores origin で あ る こ と を confirm す る た め, cervical cancer で は HPV DNA を, uterine body carcinoma や egg 巣 で は p53, KRAS and PTEN の - different を have す likely が る い heritage 伝 son を タ ー ゲ ッ ト と し, parse し た. Youdaoplaceholder0 The original diseased <s:1> frozen specimen らDNA extraction ら, the target field をPCR amplification, direct sequencingにて remains 伝 mutant を specific た た. つ い で CTC の ゲ ノ ム DNA を Whole genome amplification method に て raised し, with traces of じ 伝 sub - exist different が す る こ と を confirm し た. 【 Research Results 】 Among the 45 cases of gynecological cancer, 9 cases (20%) were CTC-positive だった. Cancer types: で で 6 cases of cervical cancer, 1 case of uterine body cancer, 2 cases of ovarian cancer だった. Youdaoplaceholder0 output たCTC count た 25 で, すべてがCK negative であった. Cervical cancer 6 cases, 5 cases (83%) の CTC で original 発 巣 と consistent し た HPV ゲ ノ ム raised を picture recognition め, egg 巣 carcinoma 2 cases, 1 case (50%) の CTC で original 発 巣 と consistent し た p53 heritage 伝 son に お け る point - different を suddenly recognize め た.

项目成果

Live-cell imaging of telomerase activity in cancer cells and analysis of its localization in gynecologic cancer.

癌细胞端粒酶活性的活细胞成像及其在妇科癌症中的定位分析。

• 发表时间: 2016
• 作者: 松本多圭夫;高倉正博;水本泰成;保野由紀子;小幡武司;飯塚崇;鏡京介;中村充宏;藤原浩
• 通讯作者: 藤原浩

Synchronous endometrioid adenocarcinomas in the uterine cervix and corpus

子宫颈和子宫体同步子宫内膜样腺癌

• DOI: 10.1111/jog.13049
• 发表时间: 2016
• 期刊: J Obstet Gynaecol Res
• 作者: Obata T;Nakamura M;Mizumoto Y;Matsumoto T;Takakura M;Fujiwara H
• 通讯作者: Fujiwara H