ラブラドール・レトリーバーに発症する銅関連性肝炎の遺伝子診断の開発

拉布拉多猎犬铜相关肝炎基因诊断的进展

• 批准号: 17H00470
• 负责人: 鷹栖 雅峰
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: 那須野ヶ原アニマルクリニック
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17H00470/
• 关键词: 銅関連性肝炎; ラブラドール・レトリバー; 遺伝性疾患

本研究ではラブラドール・レトリバーに発症する銅関連性肝炎の遺伝子頻度を調査し、遺伝子診断方法の確立を目的とした。銅関連性肝炎の原因遺伝子は常染色体に位置するATP7BおよびX染色体に位置するATP7Aの点変異によって発症する。ATP7Bの変異(c.4358G>A)は制限酵素SacII部位を導入するため、変異の検出にPCR-制限酵素断片多型(RFLP)を用いた。ATP7Aの変異(c.980C>T)は制限部位を導入しないため、変異領域に制限酵素Smll部位を人為的に導入しdCAPS法により変異を検出した。ATP7B変異(c.4358G>A)ATP7B変異の検出にはSacIIによるRFLPを用いたが、変異領域がGCリッチであり、制限酵素消化によるジェノタイピングが安定しなかった。したがってATP7B変異はPCR産物のDNA配列分析で検出した。100頭のラブラドール・レトリーバーをジェノタイピングしたところ、G/Gが84頭、G/Aが15頭、A/Aが1頭であった。GおよびAの遺伝子頻度は、それぞれ0.915および0.085と算出された。これらの結果から、ヘテロ接合(G/A)の頻度は、0.15(15.0%)、潜性ホモ(A/A)の頻度は0.0073(0.73%)と算出された。ATP7A変異(c.980C>T)Smll部位を人為的に導入したdCAPS法により検出した変異を、DNA配列分析にて確認したところ、両者の結果は一致していた。ATP7A変異はdCAPS法で正確に検出されていることを確認した。100頭のラブラドール・レトリーバーをジェノタイピングしたところ、オスではTが19頭、Cが29頭であり、TおよびCの遺伝子頻度はそれぞれ0.198および0.302と算出された。メスでは、C/Cが27頭、C/Tが22頭、T/Tは3頭であった。メスにおけるCとTの遺伝子頻度は0.731および0.269と算出された。銅関連性肝炎の発症犬の予測ATP7Bの潜性ホモ、およびATP7Aのオスにおけるヘミ接合体C/Y、メスにおける潜性ホモ(C/C)とヘテロ接合体(C/T)の遺伝子型頻度から、ラブラドール・レトリーバーの銅関連性肝炎の発症率はオスで0.53%、メスで0.65%と算出された。

This study で は ラ ブ ラ ド ー ル · レ ト リ バ ー に 発 disease す る copper masato even sex hepatitis の heritage 伝 frequency し を investigation, heritage 伝 child diagnostic methods の establish を purpose と し た. Traces of copper masato even sex hepatitis の reason 伝 は autosomal に location す る ATP7B お よ び X chromosome に position す る ATP7A の points - different に よ っ て 発 disease す る. ATP7B <s:1> variant (c.4358G>A) を limiting enzyme SacII site を introduction するため, variant <s:1> 検 exit にPCR- limiting enzyme fragment multitype (RFLP)を use を た. ATP7A の - vision (c. 980 c > T) limitations は parts を import し な い た め and limitations - vision field に enzyme Smll を man-made に import し dCAPS method に よ り - different を 検 out し た. ATP7B - vision (c. 4358 g > A) ATP7B - different の 検 out に は SacII に よ る RFLP を with い た が, - different areas が GC リ ッ チ で あ り limitations and enzyme digestion に よ る ジ ェ ノ タ イ ピ ン グ が settle し な か っ た. <s:1> たがってATP7B variant <s:1> PCR product <s:1> DNA matching analysis で検 results in <s:1> た. 100 の ラ ブ ラ ド ー ル · レ ト リ ー バ ー を ジ ェ ノ タ イ ピ ン グ し た と こ ろ, head, G / 84 G/G が が 15 A head, A/A が 1 head で あ っ た. The frequency of the 伝 sub-frequencies of the GおよびA cultural heritage 伝, それぞれ0.915および0.085と, is calculated as された. こ れ ら の results か ら, ヘ テ ロ joint の frequency は (G/A), 0.15 (15.0%) and latent ホ モ の frequency は (A/A), 0.0073 (0.73%) と calculate さ れ た. ATP7A - vision (c. 980 c > T) を artificial に Smll parts import し た dCAPS method に よ り 検 out し た - different を, DNA match column analysis に て confirm し た と こ ろ, struck の は consistent し て い た. The ATP7A variation <s:1> dCAPS method で is correct に検 results in されて る る とを とを confirmation た た. 100 の ラ ブ ラ ド ー ル · レ ト リ ー バ ー を ジ ェ ノ タ イ ピ ン グ し た と こ ろ, オ ス で は T が head, 19 C が 29 head で あ り, T お よ び C の heritage 伝 sub frequency は そ れ ぞ れ 0.198 お よ び 0.302 と calculate さ れ た. Youdaoplaceholder0 メスで, C/Cが27 heads, C/Tが22 heads, T/T であった 3 heads であった. Youdaoplaceholder0 CとT cultural heritage 伝 sub-frequency と 0.731および0.269と calculate された. Copper masato even sex hepatitis の 発 sickness dog の be ATP7B on の latent ホ モ, お よ び ATP7A の オ ス に お け る ヘ ミ gametes C/Y, メ ス に お け る latent ホ モ (C/C) と ヘ テ ロ gametes (C/T) の heritage 伝 sub-type frequency か ら, ラ ブ ラ ド ー ル · レ ト リ ー バ ー の copper masato even sex hepatitis の 発 disease rate は オ ス 0.53%, メ で Youdaoplaceholder0 0.65%と calculates された.