ディスオーダー領域を有するリン酸化タンパク質を利用した新規抗癌剤の創出

利用具有无序区域的磷酸化蛋白质创建新的抗癌药物

• 批准号: 17H00588
• 负责人: 廣瀬 松美
• 金额: $ 0.36万
• 依托单位: Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17H00588/
• 关键词: IRBIT; リボヌクレオチド還元酵素; 天然変性領域

申請者の所属する研究室でクローニングされた多機能タンパク質IRBITは、DNA合成に必要なデオキシリボヌクレオチドを合成する代謝酵素リボヌクレオチド還元酵素(RNR)の活性を制御する。RNRの阻害剤は抗癌剤として広く用いられており、IRBIT由来のペプチドをRNR阻害剤として利用できるか検討した。RNRとの結合には、IRBITのN末端約100アミノ酸の天然変性領域が重要な役割を果たしている。この配列には、多数のSer/Thr残基が存在し、うち少なくとも7カ所はリン酸化される。これらのSer/Thr残基のうち、S64, S66, S68, S70, S71, T72, S74, S76, S77, S80, T82, S84, S85, S90を、Ala(非リン酸化型)あるいはAsp(リン酸化ミミック型)に置換した部位特異的突然変異体を作成した。これらのIRBIT変異体とRNRをHeLa細胞に過剰発現し、免疫沈降法で結合を解析した。その結果、IRBITのS66, S68, S70, S71, S74, S77, S84をAlaに置換すると、RNRとの結合が顕著に阻害された。S68, S71, S74, S77, S84はリン酸化部位であり、これらのSerのリン酸化がRNRとの結合に重要である可能性が示唆された。リン酸化非依存的に結合するペプチドを見出す目的で、これらのSerをAspへの置換したIRBIT変異体とリボヌクレオチド還元酵素との結合を解析したところ、S68Dは全く結合せず、S74Dは結合が顕著に阻害された。以上の結果より、IRBITの天然変性領域のリン酸化がRNRとの結合を制御すること、RNRを抑制するIRBIT由来のペプチドの開発は困難であることが明らかになった。

The applicant belongs to the research lab. The laboratory is responsible for the multi-machine application of IRBIT and DNA synthesis. It is necessary to measure the activity of RNR in the synthesis of enzymes. RNR anti-cancer drugs, anti-cancer drugs and IRBIT. The combination of RNR and IRBIT is very important in the field of natural sex and its N-terminal. Most of the Ser/Thr residues are present, and the acid residues are acidified by the 7 residues. The Ser/Thr residues, S64, S66, S68, S70, S71, T72, S74, S76, S77, S80, T82, S84, S85, S90, Ala (non-acidified type) and Ala (non-acidified type) were characterized by the sudden change of body size (Asp). IRBIT antibodies were detected in RNR HeLa cells, and immunoprecipitation method was used to analyze the results. The results showed that the combination of IRBIT, S66, S68, S70, S71, S74, S77, S84 Ala were used to block the damage. S68, S71, S74, S77, S84. The acidified sites were not acidified. The acidified sites were acidified. The acidified Ser sites were acidified. The possibility of acidizing RNR was combined with the possibility of instigation. Acidification is not dependent on the combination of Ser and Asp to determine the purpose, and the combination of enzyme analysis, S68D and S74D to block the growth of the target. The results of the above results, IRBIT natural field chemical acidification RNR system combined with the control of the system, RNR suppression of the IRBIT system, the cause of the problem is to improve the performance of the system.