組織透明化技術を応用した予後不良な肺癌の組織形態の三次元解析

点击翻译按钮获取中文摘要

日本人の肺癌罹患率の中で、近年肺腺癌は増加傾向にある。肺腺癌の中でも、病理組織学的にmicropapillary patternやSTAS(Spread Through Alveolar Spaces)といった浸潤パターン、進展形式を示すものが予後不良であることが明らかとなったが、その形態学的な本態(三次元構成、肺実質を破壊していく過程など)は未解明である。我々は組織透明化、蛍光多重染色、レーザー共焦点顕微鏡による三次元再構成により、こうした予後不良な肺腺癌に特徴的な立体構築、浸潤様式を解析する本研究を着想した。具体的には、確立された組織透明化法であるCLARITY法に基づく組織の透明化を行った。その予備実験として、一般的な電気泳動装置を用いてマウス脳の透明化を行った。約1mm厚に薄切したマウス脳は肉眼的に透明化され、その後の蛍光免疫染色およびレーザー共焦点顕微鏡観察においても約150μmまで陽性細胞を確認できた。次に病理解剖で得られた転移性肺腫瘍を用いた検討を行った。パラフィン包埋された検体を脱パラフィン処理した後、ビブラトームを用いて500～1000μmに薄切し、組織透明化・蛍光免疫染色・レーザー共焦点顕微鏡観察を行った。Z-stack機能を用いて三次元再構成した結果、腫瘍部位と正常部位における境界の構造の知見が得られた。現在、micropapillary patternやSTASといった組織所見を含む肺癌組織検体を選定し、三次元構造解析の検討中である。本研究では三次元×多色で肺腺癌の組織形態観察を行うことで、予後不良因子とされる特殊な組織形態(micro-papillary patternやSTAS)の本態が明らかにすることを目標としている。特に、肺胞内を進展する形式、脈管侵襲をきたす過程、脈管内での立体構造の変化など、従来の二次元観察では解析困難であった事象について新たな知見が得られ、肺癌の病態解明につながることが期待される。