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植物培養細胞を用いた軽油の主成分C15アルカンを合成する遺伝子のスクリーニング

利用培养植物细胞筛选合成轻油主要成分C15烷烃的基因

基本信息

批准号：
18H00322
负责人：
小島久恵
金额：
$ 0.34万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18H00322/
关键词：
バイオ燃料培養細胞アルカン

项目摘要

軽油の主成分は炭素鎖長C15前後のアルカンであり、多くの藻類はC16の脂肪酸を合成できる。したがって、この鎖長の脂肪酸をアルカンに変換できる酵素を遺伝子導入すれば、軽油を藻類に作らせることが可能になる。被子植物は二段階の反応で脂肪酸からアルカンを作る酵素CER1とCER3を持つ。しかし、多くの植物のCER1、CER3はC24以上の超長鎖脂肪酸に特異性があり、軽油の生産には使えない。そこで本研究では、C15アルカンを合成できる植物遺伝子をスクリーニングすることを目的とした。これまでの研究で、タバコ培養細胞BY-2を用いてスイレンのCER1、CER3遺伝子を発現させ、C17アルカンを合成することに成功している。しかし、形質転換細胞株を確立する方法は結果が出るまでに2ヶ月必要である。そこで、まず一過的発現系で短いアルカンの合成能を評価する方法を確立することを目指した。BY-2にアグロバクテリウムを感染させる共培養条件や、共培養終了後のサンプルからアルカンを抽出する時の条件を検討し、一過的発現系で解析する方法を確立することに成功した。このことにより、実験の大幅なスピードアップ(遺伝子クローニング後、約2週間で結果がわかる)が図れるようになった。C15アルカンを多く合成するアサガオとトキワマンサクの蕾からRNAを調製してRNAシーケンスを行い、CER1、CER3をクローニングした。また、スイレンと同様に基部被子植物に属するアムボレラからも、CER1、CER3をクローニングした。BY-2の一過性発現で活性を評価したところ、いずれもアルカンを合成したが、最も短いものでもC21であり、むしろ、スイレンのCER1、CER3の有用性を示す結果となった。

The main component of oil, carbon carbon, carbon The growth of fatty acids, fatty acids, enzymes, enzymes and enzymes. The angiosperm "two-stage", "trans-fatty acid", "fatty acid" is used as the enzyme CER1 "CER3". CER1, CER3 C24 or more, super-long fatty acids, fatty acids, and oil can make you feel better. In this study, C15 was used to synthesize plants. This is the first step in the research, the cultivation of the cell BY-2, the detection of the CER1, the CER3 of the cell, the synthesis of the product, and the success of the synthesis. The results showed that it was necessary to make sure that it was necessary to make sure that the cell line was established in the second month. The information you need to know is that you can use the method to make sure that you are looking at the target. The BY-2 system has been tested for infection conditions, and after the test conditions have been tested, the time conditions for withdrawal have been improved, and the analytical method has been used to ensure the success of the test. We need to make sure that there is a significant increase in the number of days after the crash, and the results show that after about 2 years, we need to make sure that we do not know what to do. C15