時期特異的・組織特異的ゲノム編集のためのトランスジェニックゼブライフィッシュの作製
产生用于特定时期和组织特定基因组编辑的转基因斑马鱼
基本信息
- 批准号:18H00329
- 负责人:
- 金额:$ 0.34万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
- 财政年份:2018
- 资助国家:日本
- 起止时间:2018 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
【研究目的】ゼブラフィッシュにおいてCRISPR/Cas9法はゲノム編集を行うための重要な技術である。しかしながら受精卵にCas9とgRNAを微量注入する従来の方法では生殖細胞系列においてゲノム編集が行われるため、特定の組織や細胞における遺伝子の役割を解明することは困難であった。この問題を解決するため、平成29年度に当補助金の支援を受け、Gal4-UASシステムを利用した組織特異的ゲノム編集のためのトランスジェニック(Tg)フィッシュを作製した。これを更に発展させ、本研究では組織特異的かつ時期特異的なゲノム編集を可能にするTgフィッシュを作製する。【研究方法】ドキシサイクリン(Dox)の投与により目的遺伝子の発現を誘導することができるTet-OnシステムとGal4-UASシステムを組み合わせたTRE-Cas9-GFP, UAS : Tet-On TgフィッシュをTol2トランスジェネシス法で作製した。この魚を卵細胞でGal4を発現する系統と掛け合わせ、二重Tgフィッシュを得た。【研究成果】二重Tgフィッシュの雌をDox存在下で14日間飼育後、野生型の雄と掛け合わせて得た受精卵にアルビノ原因遺伝子slc45a2を標的とするgRNAを微量注入した。gRNA注入胚からゲノムDNAを抽出しヘテロ二本鎖移動度解析を行ったところ、標的配列への変異が検出された。また三日齢のgRNA注入胚において、黒色色素の部分的消失を確認した。一方、Dox非存在下で飼育した二重Tgフィッシュ雌由来の受精卵にslc45a2 gRNAを注入した場合は、標的配列への変異導入は認められなかった。今後はU6プロモーターの下流にgRNA配列を組み込んだTgフィッシュとTRE-Cas9-GFP, UAS : Tet-On Tgフィッシュ、Gal4系統を掛け合わせ、特定の組織におけるDox依存的な標的配列への変異導入を検証する。
[Purpose] CRISPR/Cas9 method is an important technology for compilation. The method of microinjection of Cas9 and gRNA into fertilized eggs is difficult to understand in the preparation of germ cell series, specific tissues and cells. This issue was resolved in 2009, when grants were received, and the Gal4-UAS system was utilized to compile the organization-specific database. In this study, we developed a tissue-specific and time-specific compilation of the possible Tg changes. [Research Methods] The expression of target gene was induced by the Tet-On system and Gal4-UAS system. TRE-Cas9-GFP, UAS : Tet-On Tg system was developed. The fish egg cell Gal4 is found in the system, and the double Tg is found. [Results] In the presence of double Tg and female Dox, 14 days after incubation, wild-type male and female zygotes were obtained and microinjected with gRNA labeled slc45a2. gRNA injection is required to extract DNA from the genome. 3 days after the gRNA injection, the disappearance of the black pigment was confirmed. In the absence of Doxa and Doxa, the embryos of female origin were injected with slc45a2 gRNA, and the target pairs were introduced into the embryos. In the future, the downstream gRNA alignment of U6 is expected to be demonstrated by Tet-On Tg, Tre-Cas9-GFP, UAS : Gal4 system alignment, tissue-specific Dox-dependent target alignment, and differential introduction.
项目成果
期刊论文数量(1)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
ゼブラフィッシュにおけるGa14-UASシステムを利用した新しいゲノム編集技術の開発
利用Ga14-UAS系统在斑马鱼中开发新的基因组编辑技术
- DOI:
- 发表时间:2019
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:太田能之;久木田結愛;長谷川悦子;白石純一;風間麻未;風間健太郎;綿貫豊;坂 季美子
- 通讯作者:坂 季美子
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坂 季美子其他文献
簡便な組織特異的ゲノム編集のためのトランスジェニックゼブラフィッシュの作製
生成转基因斑马鱼以进行简单的组织特异性基因组编辑
- DOI:
- 发表时间:
2018 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
岡田 千沙;中村 彰男;小濱 一弘;金子 堯子;坂 季美子 - 通讯作者:
坂 季美子
Records of Myocoptidae, Listrophoridae, Chirodiscidae, and Atopomelidae skin and fur mites in Japan
日本肌螨科、Listrophoridae、Chirodiscidae 和 Atopomelidae 皮肤螨记录
- DOI:
10.2300/acari.26.83 - 发表时间:
2017 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
坂 季美子;坂 季美子;丹羽悠二・楠本大;高田 歩 - 通讯作者:
高田 歩
ゼブラフィッシュにおける外来遺伝子の安定的発現を実現する基盤技術の開発
开发外源基因在斑马鱼中稳定表达的基础技术
- DOI:
- 发表时间:
2023 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
渡邊 拓実;佐々木悠人;Smita Takawane;姜偉華;大場友則;Rie Shishido;坂 季美子 - 通讯作者:
坂 季美子
固体NMRによるATP合成酵素サブユニットсリングの立体構造解析
固态核磁共振法分析 ATP 合酶亚基 сring 的三维结构
- DOI:
- 发表时间:
2019 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
太田能之;久木田結愛;長谷川悦子;白石純一;風間麻未;風間健太郎;綿貫豊;坂 季美子;戸所泰人 - 通讯作者:
戸所泰人
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{{ truncateString('坂 季美子', 18)}}的其他基金
ゼブラフィッシュにおける可変型遺伝子トラップ法の開発
斑马鱼可变基因捕获方法的发展
- 批准号:
24H02585 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 0.34万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
相似海外基金
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使用高效敲入技术在非洲爪蟾中开发 Tet-ON 系统
- 批准号:
24H02602 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 0.34万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
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使用 Tet-On 系统的去氧肾上腺素过表达模型阐明蛋白尿发病机制
- 批准号:
17790556 - 财政年份:2005
- 资助金额:
$ 0.34万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)