ヒト内在性レトロウイルス抗体検出のためのELISA法の確立

人内源性逆转录病毒抗体ELISA检测方法的建立

基本信息

  • 批准号:
    18H00465
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.34万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
  • 财政年份:
    2018
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2018 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

HERVとは、外来性ウイルスが霊長類進化の過程で長い年月を経て内在化した配列である。HERVが今日まで維持されているのは進化の過程で宿主の存続に有利に働くためと考えられ、この発現や免疫応答が様々な疾患の発症や進展への関与も示唆されている。しかし、現時点のHERV発現と疾病との因果関係は不明である。研究代表者はその存在意義や生理的な役割を探るために、合成ペプチドを抗原とした抗Syncytin-1抗体ELISAを開発したが、ランニングコスト軽減のために精製Syncytin-1蛋白質を用いたELISA系の確立を本研究課題の目的とした。蛋白質精製を行う上で重要となるのは発現誘導、蛋白質の可溶化、精製の3ステップである。Syncytin-1蛋白質はSurface Unit(1-317aa)とTransmenbrane Unit(318-538aa)の2のユニット構造を持つことが報告されている。このため研究代表者はHisタグを付した2種類(SU, TM)の蛋白質断片を発現するプラスミドを用いて精製を試みた。初めに、SDS-PAGEにより蛋白質の発現量を確認した。この結果、SU及びTMいずれも発現量は不安定であり、実験日によって差があることが確認された。またこれらは難溶性を示し、8%Urea添加下で可溶化が確認された。続いてニッケルアガロースおよび脱塩カラムによる精製を試みたが、精製過程でカラムに大半が吸着し、十分量の精製ができないことが判明した。また、Urea濃度が高すぎるためにELISA用プレートに固定化条件に適さないことが明らかとなった。これらの結果から、発現誘導、可溶化、精製すべてのステップで改善する必要があることが明らかとなった。今後はSyncytin-1蛋白質用いたELISAの確立には新たな界面活性剤の選択、蛋白質部位選択など条件検討を行う予定である。
HERVと ウ, externality ウ ウ スが霊 スが霊 long class evolution <s:1> process で long <s:1> years を are て internalized た た coordinated である である. Genome が today ま で maintain さ れ て い る の は の evolution process で host の deposit 続 に favorable に 働 く た め と exam え ら れ, こ の 発 や immune 応 now answer が others 々 な disorders の や 発 disease progress へ の masato and も in stopping さ れ て い る. The occurrence of と disease と and the causal relationship of と in HERV at the current time is unknown である. Research representatives は そ の meaning cut を や physiological な service agent る た め に, synthetic ペ プ チ ド を antigen と し た Syncytin resistance - 1 antibody ELISA を open 発 し た が, ラ ン ニ ン グ コ ス ト 軽 minus の た め に refined Syncytin - 1 protein を い た を ELISA is の established the purpose of this research topic の と し た. Protein refining を is in the う field of で important となる <s:1> <s:1> occurrence induction, protein <s:1> solubility, and refining <s:1> 3ステップである. The Syncytin-1 protein <s:1> Surface Unit(1-317aa)とTransmenbrane Unit(318-538aa) <s:1> 2 ユニット structure を holds <s:1> とが とが report されて る る る る る る. こ の た め research representatives は ihs タ グ を pay し た 2 species (SU, TM) の protein fragment を 発 now す る プ ラ ス ミ ド を with い て refined を try み た. Initial めに, SDS-PAGEによ によ protein <s:1> occurrence amount を confirmation た た. The <s:1> <s:1> results, SU and びTM ずれ ずれ occurrence of <s:1> instability であ <e:1>, and the experimental daily によって difference がある とが とが とが confirm された. Youdaoplaceholder0 された れら れら を insolubility を indicates された, and で solubility が with 8%Urea addition confirms された. 続 い て ニ ッ ケ ル ア ガ ロ ー ス お よ び salt off カ ラ ム に よ る refined を try み た が, refining process で カ ラ ム に most が sorption し, ten component の refined が で き な い こ と が.at し た. ま た, high concentration of Urea が す ぎ る た め に ELISA with プ レ ー ト に に immobilized conditions optimum さ な い こ と が Ming ら か と な っ た. こ れ ら の results か ら, induced 発 now, solubilization, refined す べ て の ス テ ッ プ で improve す る necessary が あ る こ と が Ming ら か と な っ た. Protein in the future は Syncytin - 1 い た ELISA の establish に は new た な interface active tonic の sentaku, protein parts sentaku な 検 ど conditions for line を う designated で あ る.

项目成果

期刊论文数量(1)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
1
1 1Ê1 > 2:异核双原子催化剂的 CO 氧化性能优于同核催化剂
  • DOI:
    10.1002/smtd.201800480
  • 发表时间:
    2019-09-01
  • 期刊:
  • 影响因子:
    12.4
  • 作者:
    Li, Fengyu;Liu, Xinying;Chen, Zhongfang
  • 通讯作者:
    Chen, Zhongfang
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日比 悠里名其他文献

Tat-TAR-PTEFb(Cyclint1)を標的としたin sillico薬剤スクリーニング
针对 Tat-TAR-PTEFb (Cyclint1) 的计算机药物筛选
  • DOI:
  • 发表时间:
    2007
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    朝光 かおり;日比 悠里名;岡本 尚
  • 通讯作者:
    岡本 尚

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相似海外基金

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    $ 0.34万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research
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    X00120----087085
  • 财政年份:
    1975
  • 资助金额:
    $ 0.34万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research
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