抗血小板薬クロピドグレル及びチクロピジンの代謝活性化に関与するCYP分子種の研究

抗血小板药物氯吡格雷和噻氯匹定代谢激活中CYP分子种类的研究

• 批准号: 19923022
• 负责人: 金平 麻珠子
• 金额: $ 0.49万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19923022/
• 关键词: クロピドグレル; 薬物代謝; ファーマコゲノミクス

クロピドグレル(CLP)は、チクロピジンと共通のチエノピリジン骨格を有する抗血小板剤である。本剤は肝臓で代謝を受けて生成する活性代謝物の-SH基が、血小板上のADP受容体(P2Y12)と不可逆的に結合することでその活性を阻害し持続的に血小板凝集抑制作用を示す。最近、欧米人の肝薬物代謝酵素CYP2C19のintermediate metabolizer(IM), poor metabolizer(PM)で、CLPの活性減弱が報告され、東洋人ではCYP2C19のPMが多いことから注目されている。CLPの肝代謝にはCYP1A2, 2B6, 2C19,3A4が関与するとされるが、活性代謝物の生成に対して各CYP分子種がどの程度寄与するかは不明であったことから、本研究ではその検討を目的とした。CLPをCYP2C19のextensive metabolizer(EM),PM由来のヒト肝ミクロソーム、及び市販のCYP3A4及び2C19のバキュロ発現系酵素中で、中間代謝物の分解を防ぐためにN-acetylcystein存在下、常法に従ってインキュベーションし、反応液をアセトニトリル除蛋白し遠心分離上清をLC-MS/MS分析に供した(Waters UPLC, Quattro Premier XE、 カラムWaters BEG C18 2.0×100mm40℃、移動相ギ酸-アセトニトリルグラジエント0.2mL/min)。MS/MS測定はMS scan, daughter ion scan, MRMの3種のモードにて行った。CLPから活性代謝物は2段階の代謝を経て生成するが、CYP3A4とCYP2C19では1段目の主たる代謝物が異なっていた。CYP3A4単独では活性代謝物の生成はCYP2C19に比べ少ないが、CYP2C19にCYP3A4を加えると活性代謝物の生成が増加した。CYP2C19のPMではEMに比べて活性代謝物の生成が1/5から半分程度であった。以上より、CLPの活性代謝物はCYP3A4とCYP2C19が共同的に働いて生成するが、CYP2C19がより重要な働きを行っていると考えられた。以上の他にも多くの構造未知の代謝物の生成が認められており、現在、それらの構造の同定を進めている。

The anti-platelet agent is available in the form of CLP. This drug inhibits platelet aggregation by inhibiting the activity of the active metabolite-SH group, ADP receptor (P2Y12) on platelets, irreversible binding, and persistence of this activity. Recently, a decrease in the activity of CYP2C19 intermediate metabolizer(IM), poor metabolizer(PM) and CLP in Europeans has been reported, and more attention has been paid to CYP2C19 PM in Europeans. CYPs 1A2, 2B6, 2C19, 3A4 are related to the metabolism of CLP, and the production of active metabolites is related to the degree of metabolism of each CYP molecular species. CLP CYP2C19 extensive metabolizer(EM),PM origin of CYP3A4 and CYP2C19 in the enzyme, intermediate metabolite decomposition prevention in the presence of N-acetylcystein, normal method of reaction solution, reaction solution to remove protein, remote isolation supernatant for LC-MS/MS analysis (Waters UPLC, Quattro Premier XE, Color: Waters BEG C18 2.0× 100mm 40 ℃, Mobile Phase: Acid-0.2mL/min). MS/MS measurements include MS scan, daughter ion scan, MRM and three different types of measurements. The active metabolites of CLP are produced in the second phase of metabolism, and the main metabolites of CYP3A4 and CYP2C19 are different. CYP3A4 alone produces less active metabolites than CYP2C19, while CYP2C19 increases production of active metabolites. CYP2C19 and PM are less than 1/5 of the active metabolites produced. The active metabolites of CYP3A4 and CYP2C19 are commonly produced and CYP2C19 is important. The above mentioned metabolites of unknown structure are generated in different ways, and the structure is determined in different ways.