交雑個体が検出されたハナシノブの自生地3カ所における追跡調査

对发现杂交个体的花忍三个自然栖息地进行跟踪调查

• 批准号: 20917005
• 负责人: 稲葉 一文
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: 熊本県教育庁文化課
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20917005/
• 关键词: ハナシノブの交雑; RAPD分析; PCR-RFLP分析

平成20年度は、雑種と思われる個体が検出された4カ所の自生地の内3カ所(1カ所は環境省九州地区自然保護事務所により調査済み)について全個体を対象にした追跡調査を行った。実験方法は、複葉2枚程度からCTAB法による核DNAの抽出を行い、その後RAPD分析およびITS領域によるPCR-RFLP分析を行った。供試材料は、高森町河原上玉来産152個体、高森町河原中大道産78個体、高森町野尻祭場産6個体、人工交配種6個体、北海道の園芸業者から購入した苗26個体(エゾハナシノブ14個体、カラフトハナシノブ4個体、クシロハナシノブ4個体、ヒダカハナシノブ4個体)の合計268個体である。実験の結果、RAPD分析では、高森町河原上玉来産で16個体、高森町河原中大道産で2個体、高森町野尻祭場産で1個体の雑種と思われる個体を検出することができた。次にPCR-RFLP分析では、セイヨウハナシノブにのみみられるDNAバンドは調査を行ったハナシノブからは1個体も検出されなかった。今回のRAPDプライマーによる雑種判定に用いたDNAバンドは、ハナシノブの種内変異を検出している可能性も考えられることから、日本大学と共同で新たにプライマーの開発を行った。その結果、エゾハナシノブ、カラフトハナシノブ、クシロハナシノブ、ヒダカハナシノブ、セイヨウハナシノブの5種に共通したDNAバンドを出現させるプライマー(26塩基)を開発することができた。この開発したプライマーは、RAPDプライマーと比較し、より的確に雑種個体の検出が期待できる。平成21年度は、このプライマーを用い再度ハナシノブの全自生地において調査を行いたいと考えている。※供試材料については、環境省九州地区自然保護事務所野生生物課および熊本県環境生活部自然保護課に採取許可を得ている。

In 2010, the Ministry of Environment conducted a survey of the whole population of the Kyushu Regional Nature Conservation Office. The method of DNA extraction, RAPD analysis and PCR-RFLP analysis were carried out by CTAB method. 152 individuals from Kawahara, Takamori, 78 individuals from Kawaranaka Avenue, Takamori, 6 individuals from Nojiri Shrine, 6 individuals from artificial mating species, and 26 individuals from Hokkaido's garden industry (14 individuals, 4 individuals, 4 individuals, and 4 individuals) were tested. The results of RAPD analysis showed that there were 16 individuals from Kawawara Kawawara, 2 individuals from Kawawara Nakajima, 1 individual from Noshiri, Takamori. PCR-RFLP analysis was performed on the DNA samples collected from the samples. In the present study, RAPD was used to determine the possibility of intraspecific variation of DNA. 5 kinds of common-channel DNA fragments, such as the results, the patterns, the patterns. The development of RAPD is expected. Heisei 21 year, the first time in the history of the investigation, the second time in the history of the investigation.※ The test material was approved by the Wildlife Division, Kyushu Regional Nature Conservation Office, Ministry of Environment, Kumamoto Prefecture.