日本産無尾両生類の精液凍結保存技術の確立

点击翻译按钮获取中文摘要

日本列島の無尾両生類は種数が少ないものの殆どが固有種であるが、近年、生息地環境の変化などにより、その生息数が減少しており、その保護対策が急務とされる。本研究では、無尾両生類の保全策の一環として、精液の凍結保存技術の開発を試みた。本研究では、乾田化などの環境変化の影響を被っているとされる「ツチガエル」を用い、精液凍結保存における(1)凍害防止剤の組成(2)凍結保存液の組成について解析した。凍害防止剤は「DMSO」と「グリセリン」を用い、両者を1/10倍リンゲル液に添加し、その溶液内での精子活性を比較した。その結果、グリセリン添加では精子活性が全くなくなる一方、DMSOについては添加の有無で精液活性に影響が殆どなかった。このことから凍害防止剤としてはDMSOが有効であることが示された。さらに、最適DMSO濃度について2%～6%の範囲で比較した。その結果、5%以上では精子活性がなくなることから2～4%が適していることが明らかとなった。一方、凍結保存液として、蒸留水、両生類リンゲル液(等倍、1/10倍)、0.1Mグルコース溶液を比較した。各溶液にDMSO液(最終濃度4%)を添加し、-196℃で1日間保存後に解凍し、精子活性を測定した。その結果、各溶液ともに精子活性が非常に低下していたが、両生類リンゲル液(等倍)ではわずかながら精子活性が保たれていた。この結果から、凍結保存液としては両生類リンゲル液(等倍)が適していることが示唆された。日本産無尾両生類の精液凍結保存についてはこれまで報告がないため、本研究により日本産両生類の精液凍結保存における凍害防止剤と凍結保存液の組成に関する、基礎データ得ることができた。しかし本研究はツチガエルのみの研究であるため、今後は他の日本産両生類についても精液凍結技術を開発することで、固有性の高い日本産無尾両生類の生物多様性の保全に努める必要がある。