マウス精子の凍結保存ならびに凍結マウス精子の体外受精技術系に関する研究

小鼠精子超低温保存及冷冻小鼠精子体外受精技术研究

• 批准号: 04680048
• 负责人: 中潟 直己
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Nippon Institute for Biological Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 1993
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04680048/
• 关键词: マウス精子の凍結保存; 透明帯切開術; 体外受精; マウス精子; 凍結保存

安定した高い受精率が得られ、しかも融解後の精子懸濁液からの保存液除去操作を必要としない簡易な凍結マウス精子の体外受精技術系の確立を目的とし、受精の場における凍結精子懸濁液の希釈倍率の検討を行なった。さらに、受精率を高めるための卵子側からのアプローチとして受精率の低い凍結精子と透明帯切開卵子との間で体外受精を行ない、受精率向上に対する透明帯切開術の有用性について検討した。受精の場における凍結精子懸濁液の希釈倍率の検討融解したICR精子懸濁液を200mulの受精用培養液中に0.5,1,2あるいは4mul添加した後、同系雌マウスから採取した過排卵卵子をそれぞれの精子浮遊液内に導入して媒精を行なった結果、2mul以上の区(希釈倍率100倍以下)の受精率は40%以下と低値であったが、0.5および1mul添加区(200〜400倍希釈)で比較的良好な受精率が得られた(71〜75%)。受精率の低い凍結精子と透明帯切開卵子間での体外受精受精率の極めて低いC57BL/6Nの凍結精子について透明帯の一部を切開した卵子を用いて体外受精を行なった結果、受精率および供試卵に対する新生仔への発生率は、透明帯の切開を行なわなかった正常卵子を用いた時のそれら値に比べ、極めて高値を示した(受精率:67%,供試卵に対する新生仔への発生率:14%)。以上の結果より、凍結マウス精子を体外受精に用いる場合、融解後の精子懸濁液からの完全な保存液の除去処理は必ずしも必要でなく、単に保存液を含む凍結精子懸濁液を受精の場の培養液で200〜400倍に希釈した後に媒精すれば、受精を阻害することなく比較的良好な受精率が得られることが知られた。また、受精能の極めて低い凍結精子においては、卵子側からのアプローチとして卵子の透明帯切開術が受精率の向上に有効な手段であることが判明した。

The technique of in vitro fertilization of diazepam (diazepam), high fertilization rate, high fertilization rate and high fertilization rate. High fertilization rate, high fertilization rate, low fertilization rate, low fertilization rate, high fertilization rate, high fertilization rate, Fertilized, fertilized (2) after the addition of 4mul, the homologous female oocytes were collected from ovulated oocytes, and the sperm floating fluid was injected into the sperm matrix. the results showed that the fertilization rate was lower than 40% in the zone above 2mul (less than 100 times the hope rate), and the good fertilization rate was 7175% higher than that in the 1mul addition zone (20000400). Low fertilization rate, low fertilization rate, low C57BL/6N fertilization rate, low fertilization rate, low fertilization rate, low The fertilization rate is 67%. The birth rate of newborn babies is 14%). The results of the above results showed that the sperm were fertilized in vitro after fusion and thawing, the sperm were completely preserved, the sperm were removed, the necessary sperm were removed, the sperm were fertilized, the sperm were fertilized, the field fertilisation solution was 200, 400 times, and the matrixwas detected. The fertilization rate was higher than that of the normal fertilization rate. The fertilization rate can be improved by means of an improved method to determine the fertilization rate.

项目成果

Nakagat.N: "Production of normal young following injection of frozen-thawed mouse spermatozoa into Fallopian tubes of pseudopregnant females." Exp.Anim.41. 519-522 (1992)

Nakagat.N：“将冻融的小鼠精子注射到假孕雌性的输卵管中后，可以产生正常的幼仔。”

N.Nakagata and T.Takeshima: "Cryopreservation of mouse speramtozoa from inbred and F_1 hybrid strains." Exp.Anim.42. 317-320 (1993)

N.Nakagata 和 T.Takeshima：“来自近交系和 F_1 杂交品系的小鼠精子的冷冻保存。”

N.Nakagata: "Survival of mouse normal morulae and blastocysts derived from in vitro fertilization after ultrarapid freezing." Exp.Anim.42. 229-231 (1993)

N.Nakagata：“体外受精后小鼠正常桑葚和囊胚的存活率。”

安斉政幸、中潟直己、松本和也、他: "超急速凍結保存を用いたトランスジェニックマウス由来胚の凍結保存" 実験動物. 42. 467-470 (1993)

Masayuki Anzai、Naoki Nakagata、Kazuya Matsumoto 等人：“使用超快速冷冻保存技术对转基因小鼠的胚胎进行冷冻保存”实验动物 42. 467-470 (1993)。

N.Nakagata: "Production of normal young following transfer of mouse embryos obtained by in vitro fertilization between cryopreserved gametes." J.Reprod.Fert.99. 77-80 (1993)

N.Nakagata：“通过冷冻保存的配子之间的体外受精获得的小鼠胚胎移植后产生正常的幼仔。”