膵臓由来熱ショック蛋白の免疫によるウイルス誘導糖尿病の発症制御機構の解明

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「研究目的」インスリン依存性糖尿病(IDDH)の発症制御をめざし、正常マウスの膵臓から抽出した熱ショック蛋白、Hsp70をマウスに免疫することでウイルス誘導糖尿病の発症が抑制されることを見い出している。また肝臓由来Hsp70の免疫ではこのような現象は認められない。このHsp70免疫に関する作用機序として(1)膵臓由来Hsp70に結合していた抗原ペプチドによって膵臓に対する自己免疫反応が抑制される、(2)免疫担当細胞(調節性T細胞、NKT細胞、NK細胞等)の活性化、(3)小胞体ストレスやオートファジー機構への影響、及び(4)Hsp70自身がToll-like receptor ligandとして作用し樹状細胞を直接活性化するなどの可能性を想定している。今回はこのHsp70に結合していた抗原ペプチドを遊離させ、液体クロマトグラフィーの連続分画について質量分析装置(MALDI-TOF/TOF)を用いて解析し、網羅的なペプチド(Pep)の検出を試みた。「研究成果」糖尿病誘導性EMC virus感染マウス,非感染マウスの膵臓と肝臓からそれぞれHsp70を抽出し、ATP,MgCl 2処理により結合Pepを遊離させた。Hsp70と遊離Pepは限外濾過カートリッジカラム(分子量、10,000以上をトラップ)で分離精製し、遠心濃縮後、液体クロマトグラフィー(0.1%TFA水溶液にアセトニトリル、20～60%のグラディエント)により分画し、連続フラクションを質量分析装置で解析した。各Pepは分子量、750～2221の範囲で検出された。分子量が一致したPepを同一と仮定すると、82種のPepを検出した。またHspの由来毎にPepの差異を比較検討した結果、正常マウス膵臓特異的Pepは4種、感染マウス膵臓特異的Pepは16種であった。現在これらペプチドの同定を試みているが困難を極めている。今後、これらペプチドをアジュバントと共に免疫することによる糖尿病発症抑制効果、また他の可能性として(4)については肝臓由来Hsp70の免疫で発症抑制効果が認められないことから可能性は低いものと考えており、(2)(3)について検討する予定である。