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膵臓由来熱ショック蛋白の免疫によるウイルス誘導糖尿病の発症制御機構の解明

阐明通过胰腺热休克蛋白免疫控制病毒诱发糖尿病发病的机制

基本信息

批准号：
20929017
负责人：
団克昭
金额：
$ 0.35万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20929017/
关键词：
IDDM Hsp70 抗原ペプチド

项目摘要

「研究目的」インスリン依存性糖尿病(IDDH)の発症制御をめざし、正常マウスの膵臓から抽出した熱ショック蛋白、Hsp70をマウスに免疫することでウイルス誘導糖尿病の発症が抑制されることを見い出している。また肝臓由来Hsp70の免疫ではこのような現象は認められない。このHsp70免疫に関する作用機序として(1)膵臓由来Hsp70に結合していた抗原ペプチドによって膵臓に対する自己免疫反応が抑制される、(2)免疫担当細胞(調節性T細胞、NKT細胞、NK細胞等)の活性化、(3)小胞体ストレスやオートファジー機構への影響、及び(4)Hsp70自身がToll-like receptor ligandとして作用し樹状細胞を直接活性化するなどの可能性を想定している。今回はこのHsp70に結合していた抗原ペプチドを遊離させ、液体クロマトグラフィーの連続分画について質量分析装置(MALDI-TOF/TOF)を用いて解析し、網羅的なペプチド(Pep)の検出を試みた。「研究成果」糖尿病誘導性EMC virus感染マウス,非感染マウスの膵臓と肝臓からそれぞれHsp70を抽出し、ATP,MgCl 2処理により結合Pepを遊離させた。Hsp70と遊離Pepは限外濾過カートリッジカラム(分子量、10,000以上をトラップ)で分離精製し、遠心濃縮後、液体クロマトグラフィー(0.1%TFA水溶液にアセトニトリル、20～60%のグラディエント)により分画し、連続フラクションを質量分析装置で解析した。各Pepは分子量、750～2221の範囲で検出された。分子量が一致したPepを同一と仮定すると、82種のPepを検出した。またHspの由来毎にPepの差異を比較検討した結果、正常マウス膵臓特異的Pepは4種、感染マウス膵臓特異的Pepは16種であった。現在これらペプチドの同定を試みているが困難を極めている。今後、これらペプチドをアジュバントと共に免疫することによる糖尿病発症抑制効果、また他の可能性として(4)については肝臓由来Hsp70の免疫で発症抑制効果が認められないことから可能性は低いものと考えており、(2)(3)について検討する予定である。

Objective: To investigate the pathogenesis of diabetes mellitus (IDDH). The origin of Hsp70 is unknown. The mechanism of action of Hsp70 related to immunity is as follows: (1) The immune response is inhibited by Hsp70 binding to antigen,(2) Immune responsible cells (3) the influence of microcellular structure on the activation of regulatory T cells, NKT cells, NK cells, etc., and (4) the possibility of direct activation of dendritic cells by Hsp70 itself as a Toll-like receptor ligand. In this paper, Hsp70 is used to analyze and collect the antigen and extract it from the liquid by MALDI-TOF/TOF. "Results" Diabetes-induced EMC virus infection, non-infection of the virus and liver damage caused by Hsp70, ATP, MgCl2 treatment of Pep binding to free. Hsp70 and free Pep are separated and purified by external filtration (molecular weight, 10,000 or more), and then concentrated by telecentricity. The solution is separated and analyzed by mass analyzer (0.1% TFA aqueous solution, 20~60% TFA aqueous solution). The molecular weight of each Pep is 750~2221. The molecular weight is uniform, and 82 kinds of Pep are produced. The differences between Hsp and Pep were compared. There were 4 normal Pep species and 16 infection Pep species. Now, try to make it difficult for you to choose the right one. In the future, the possibility of inhibiting the development of diabetes mellitus and the possibility of inhibiting other diabetes mellitus will be examined.(4) The possibility of inhibiting the development of diabetes mellitus and the possibility of inhibiting the development of diabetes mellitus will be examined.(2) The possibility of inhibiting the development of diabetes mellitus and the possibility of inhibiting the development of diabetes mellitus will be examined.