ヘルペスウイルス潜伏感染及び再活性化における標的組織内蛋白質の発現解析

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「研究目的」 単純ヘルペスウイルス(HSV)の潜伏感染及び再活性化時に変動するマウス神経節内蛋白質の発現量を液クロに連動した質量測定装置(LC-MS/MS)を用いて解析した。「実験材料及び方法」 HSV-1(KOS),HSV-2(169)をBalb/cマウスに5x10E5 PFU/10μ1で経鼻感染し、4週間経過した潜伏感染マウスに対し、紫外線ランプ(15W)を30cmの固定位置より10分間照射することにより、再活性化刺激を加えた。これら1.非感染正常、2.潜伏感染、3.再活性化刺激後の状態にあるマウスの三叉神経節(HSV-1)、または腰仙骨神経叢(HSV-2)を摘出し、総蛋白質、及びgenomic DNA, Total RNAを抽出した。HSV由来DNAの検出をnested PCRにより、HSV由来既知RNA(LAT, ICPO, ICP4 etc)をRT-PCRにより解析した。潜伏感染および再活性化が確認されたマウスの神経節抽出蛋白質をTrypsinにより断片化し、蛋白質標識試薬(iTRAQ)で標識した後、各実験群の比較検体を混合し、塩濃度勾配によるカラム分画をLC-MS/MSにより解析した。「結果及び考察」 1.神経節内において、HSV由来DNAはいずれの感染状態においても検出されなかった。2.各感染状態で明確に検出できたHSV由来既知RNA分子は、LATのみであった。3.LC-MS/MSを用いた解析ではまずfirst MSによって発現蛋白の酵素断片質量情報から蛋白同定を行い、更にMS/MSによって各蛋白存在比率を相対的に定量した。非感染正常マウスと比較して潜伏感染状態ではストレス蛋白質の発現変動が著しく、再活性化刺激状態では数種キナーゼ活性などが変動していた。これらの分子を抑制、または高発現させることにより各感染過程における役割を明らかにしていく予定である。