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ヒト培養細胞への遺伝子導入・発現阻害によるフィブリノゲン生成・分泌に及ぼす影響

通过基因导入和表达抑制到人类培养细胞中对纤维蛋白原产生和分泌的影响

基本信息

批准号：
20932007
负责人：
澤村暢
金额：
$ 0.37万
依托单位：
Hamamatsu University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20932007/
关键词：
フィブリノゲン RNAi

项目摘要

1. 目的フィブリノゲンはAα、Bβ、γの3種類のポリペプチド鎖がジスルフィド結合した分子量約340,000の糖タンパク質で、複雑な血液凝固システムの最終産物であるフィブリンの前駆物質として知られている。浜松医科大学附属病院にて診断されたフィブリノゲン欠損症患者の遺伝子および血中のフィブリノゲンを解析したところ、Aα鎖の遺伝子であるFGA遺伝子に欠落変異が存在し、それによって血中にフィブリノゲンが分泌されていなかった。本研究では3種類のポリペプチド鎖のうちAα鎖の欠失をヒト肝臓由来培養細胞でRNAiによって擬似的に再現しその動態について研究を行う。これによりAαの異常によるフィブリノゲン欠損症のメカニズムを明らかとし、日常の治療や薬剤の開発、臨床検査の発展に役立てる事を目的とする。2. 結果 siRNAによりAα鎖の合成を抑制する事により細胞内での合成および培養液中に分泌されるAα鎖の量は減少を示した。培養液中に分泌された量が減少した事から、他のBβ鎖、γ鎖の分泌量も低下している事がこの結果より見て取れる。また、細胞内でのAα鎖合成低下によりBβ鎖、γ鎖の合成量、蓄積量に変化が見られると予想されたが今回の結果からは、はっきりしなかった。3. 考察 SN Royらの培養細胞を用いた研究からAα鎖とγ鎖は余剰に細胞内で産生され蓄積されており、必要時に新たにBβ鎖が産生される事によってAα-Bβ-γと結合し細胞外へ分泌される。我々が解析したAα鎖の欠損によるフィブリノゲン欠損症患者では血中にAα鎖のみでなく、他のBβ鎖、γ鎖も分泌されていない事から、ヒトの体内においても肝臓で合成されたフィブリノゲンは、ほぼ完全な型にならないと分泌されない事が推測された。今回のRNAiの結果からAα鎖の分泌量が低下した事からBβ鎖、γ鎖の分泌も低下した事が予想される。細胞内での合成量はウエスタンブロットでは確認できなかったが、Aα鎖の合成が低下する事でBβ鎖が消費されず細胞内に蓄積する事が推測される。

1. Objective: To study the molecular weight of the final products of the three kinds of carbohydrate Aα, Bβ and γ. The Affiliated Hospital of Bangatsu Medical University diagnosed the presence of FGA gene in the blood of patients suffering from FGA gene deficiency and the secretion of FGA gene in the blood. In this study, three types of RNAi were studied, including the generation of RNAi in cultured cells and the dynamics of RNAi. The purpose of this study is to clarify the status of Aα abnormalities, to develop daily treatment and drug administration, and to develop clinical investigations. 2. As A result, siRNA synthesis was inhibited, and the amount of Aα lock synthesized in cells and secreted in culture medium decreased. The secretion of Bβ-and γ-lock in culture medium was decreased. The synthesis of Aα-lock in cells is low, and the synthesis and accumulation of Bβ-lock and γ-lock are low. 3. To investigate the use of SN Roy in cultured cells, we studied the intracellular production, accumulation and, if necessary, production of new Bβ-locks, and extracellular secretion of Aα-Bβ-γ. In the case of Aα-lock deficiency, the Aα-lock and Bβ-lock are secreted in the blood, and the A α-lock and B β-lock are secreted in the body. The result of RNAi is that the secretion of Aα lock is lower than that of Bβ lock and γ lock. It is confirmed that the synthesis of Aα lock is low, and the accumulation of Bβ lock in cells is speculated.