Aα鎖遺伝子に変異を持つフィブリノゲン欠損症患者の分子生物学的原因解析

Aα链基因突变纤维蛋白原缺乏症患者的分子生物学原因分析

• 批准号: 23931026
• 负责人: 竹澤 由夏
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-23931026/
• 关键词: フィブリノゲン欠損症; Aα鎖遺伝子; ハプロタイプ解析

フィブリノゲン(Fbg)Aα鎖遺伝子のイントロン(IVS)3からIVS4までの1238bpが欠失(Δ1238bp)し、さらにIVS1+3の部位がアデニンからシトシンに変異した(Intron1+3A>C)コンパウンドヘテロ型の無Fbg血症患者(Kurashiki II)とFbgAα鎖遺伝子のIVS3からIVS4までのΔ1238bpホモ型の欠失を示す無Fbg血症患者(Yokkaichi)を同定した。この2種類の遺伝子異常でどのようなmRNAができ蛋白欠損に繋がるか、DNAをPCRにより増幅しPCR産物をpTargetベクター内に挿入しCHO細胞に一過性に発現させた。mRNAを精製しシークエンスを行ったところIVS1+3A>Cの変異を持つ遺伝子ではExon(Ex)1の18塩基が欠失しEx2に続くmRNAと、IVS1がスプライスされずにEx1-IVS1-Ex2と続くmRNAが1:1の割合で確認された。また、Δ1238bp変異を持つ遺伝子では、Ex4を含む1238bp部分がそのまま抜け落ち、Ex3-IVS3-IVS4-Ex5と続くmRNAとΔ1238bpを除いて正しくスプライスされEx3-Ex5と続くmRNAが1:6の割合で確認された。これらの異常な遺伝子から産生されたmRNAは蛋白質に翻訳されるとフレームシフトにより通常よりも短いペプチド鎖が合成されることが推察された。これらはユビキチンプロテアソーム系によって破壊されるため、Aα鎖が合成されずFbgが生成されないために無Fbg血症を呈したと考えられた。またFbg遺伝子付近に存在する8領域のマイクロサテライトついてSTR-PCRを行い、患者と両親のハプロタイプ解析を実施した。その結果D4S2962、D4S3021、D4S263領域から、KurashikiIIとYokkaichiの2つの遺伝子は別人由来であることが示唆された。文献的にも国内外にAαΔ1238bpの異常が報告されており、発端者が複数人存在することが考えられた。

The 1238bp deletion (Δ1238bp) in IVS 3 and the deletion (Δ1238bp) in IVS 4 are identical to those in Kurashiki II and Yokkaichi, respectively. These 2 types of gene abnormalities were found in CHO cells with mRNA and DNA amplification. mRNA refinement is carried out by IVS1+3A>C and the difference between Exon(Ex)1 and Exon(Ex) 1 is 18. Exon mRNA, IVS1 is carried out by Ex1-IVS1-Ex2 and Exon mRNA is 1:1. Ex3-IVS3-IVS4-Ex5-IVS5-IVS5-IV This abnormal gene is produced by the mRNA of the protein, which is usually synthesized by the gene. The first step is to create A new system of FBG. Fbg gene expression in the presence of 8 areas of STR-PCR, patient and parent analysis D4S2962, D4S3021, D4S263 Domain, Kurashiki II Yokkaichi 2 AαΔ1238bp anomaly was reported in the literature at home and abroad.

项目成果

2例のフィブリノゲン欠損症患者Kurashiki IIとYokkaichiの同定とハプロタイプ解析

仓敷II号和四日市两名纤维蛋白原缺乏症患者的鉴定和单倍型分析

• 发表时间: 2011
• 作者: Tsujimoto K;Ikeda K;Yamasaki H;Uozaki M;Nishide M;Irie H;Koyama AH;竹澤由夏
• 通讯作者: 竹澤由夏