硬組織に対する迅速な脱灰法の検討―染色性の保持を目指して―

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病理組織標本作製の際に、硬組織を薄切可能にするために『脱灰』の工程が施される。脱灰液には、酸性脱灰液と中性脱灰液の他に、数種の溶液を混合した脱灰液など多数の処方が報告されている。しかしながら、(1)迅速性、(2)操作の容易性と経済性、(3)組織障害度が少なく染色が安定、といった条件を全て満足させる脱灰液についての報告はない。また、脱灰の迅速性を追求すれば染色性が劣化し、染色性を求めれば脱灰に時間がかかる、といったジレンマが生じている。さらに、顎骨など太くて硬い骨組織では脱灰に時間を要し、追加治療の選択が遅れるといった問題も生じている。そこで今回、(1)を満足させるために脱灰過程で超音波を併用し、(2)を満足させるために市販の超音波洗浄装置を用い、(3)を満足させるためにギ酸を使用し、迅速性と染色性の保持を兼ね備えた簡便で安価な脱灰法について検討した。超音波照射時に作用するキャビテーション発生は、超音波強度と周波数に委ねられる(キャビテーション閾値)。予備検討ではD-マンニトールによるフリーラジカル消去効果について検討したが、30%のD-マンニトールにはフリーラジカル消去効果の他に高粘度によるキャビテーション閾値上昇効果(キャビテーションが起こり難い)があり、結果的に機械的作用による組織・細胞破壊を軽減できた。更に、実験用に購入した牛骨や剖検例の椎骨を用いた各種条件下(脱灰時間を30分毎に最長120分)での脱灰試験について、超音波照射下での脱灰法は通常の放置法の半分の時間で脱灰が進行する結果を得た。また、ギ酸を用いた脱灰試験では、D-マンニトール添加の有無に依存することなく全てのサンプルで良好な染色性(H・E染色や複数抗体による免疫染色)を確認できた。これは、ギ酸そのものにキャビテーション閾値上昇効果があると推察された。以上より、ギ酸と超音波を併用すれば迅速性と染色性に富んだ脱灰が可能となることが示唆された。