骨髄異形成症候群発症におけるDNAメチルトランスフェラーゼ遺伝子がおよぼす影響

DNA甲基转移酶基因对骨髓增生异常综合征发生的影响

• 批准号: 24931044
• 负责人: 神田 智之
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-24931044/
• 关键词: 骨髄異形成症候群(MDS); DNAメチルトランスフェラーゼ遺伝子; メチル化阻害剤

(目的)MDS患者におけるDNAメチル化異常を解析し、化学療法剤の反応性、副作用、骨髄移植後の定着率、再発などの個人差と比較検討し、予後や治療効果に及ぼす影響を検討する。症例を集積し、特定のDNAメチル化異常が予後や治療効果と関連する事を明らかにし、これを臨床診断、治療に応用する事でテーラーメード医療を目指す。前段階として白血病細胞株を用いてメチル化阻害剤による影響を検討した。(計画、方法)DNMT1酵素活性を直接阻害するメチル化阻害剤を用いて白血病細胞株(K562、THP-1)を3日間培養し、Dnmt1遺伝子発現、増殖能への影響を確認した。Dnmt1遺伝子発現をReal-time PCR法、増殖能の測定には、Cell Proliferation Kit I及び生細胞数測定にFuchs-rosenthal計算盤を用いた。(成果)メチル化阻害剤による各白血病細胞におけるDMT1遺伝子発現の阻害を確認した所、K562細胞で78%、THP-1細胞で68%のDNMT1遺伝子発現低下を認めた。この結果、メチル化阻害剤が各白血病細胞のDnmt1遺伝子発現を阻害している事が確認できた為、次にメチル化阻害剤投与による細胞増殖能の影響及び生細胞数を測定した。細胞増殖能は各白血病細胞共に濃度依存性に抑制されK562細胞で最大74%、THP-1細胞で最大61%の抑制効果が得られ、生細胞数算定においてもK562細胞で最大52%、THP-1細胞で最大45%の抑制効果が得られた。この結果は、DNMT1酵素活性が腫瘍細胞の増殖に関与し、DNMT1酵索活性を阻害する事で腫瘍細胞の増殖を抑制できる事が示唆された。

Objective: To analyze the DNA abnormalities in MDS patients, the adverse reactions of chemotherapy agents, side effects, stable rates of bone marrow transplantation, individual differences in recurrence, and to evaluate the effects and effects of chemotherapy. Cases are aggregated, specific DNA abnormalities are identified, treatment results are correlated, and clinical diagnosis and treatment results are indicated. The first phase of leukemia cell lines was studied by using a chemical inhibitor. (Project, Method) Direct inhibition of DNMT1 enzyme activity, identification of the effects of chemical inhibitors on leukemia cell lines (K562, THP-1), 3-day culture, DnMT1 gene production, and proliferation. Dnmt1 gene detection Real-time PCR, Cell Proliferation Kit I and Fuchs-Rosenthal calculation (Results) Inhibition of DNMT1 gene expression in leukemia cells was confirmed by 78% of K562 cells and 68% of THP-1 cells. The results showed that the inhibition of Dnmt1 gene expression in each leukemia cell was confirmed by the effect of chemical inhibitor on cell proliferation and the number of viable cells. Cell proliferation was inhibited by 74% in K562 cells and 61% in THP-1 cells in a concentration-dependent manner, and by 52% in K562 cells and 45% in THP-1 cells. These results indicate that DNMT1 enzyme activity is associated with tumor cell proliferation and that inhibition of DNMT1 enzyme activity inhibits tumor cell proliferation.