エポキシ樹脂包埋試料における免疫組織化学のための抗原賦活化の検討

环氧树脂包埋样品中免疫组织化学抗原修复检查

• 批准号: 25930008
• 负责人: 荻原 直子
• 金额: $ 0.26万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-25930008/
• 关键词: 免疫電顕; 抗原賦活化

免疫電顕目的ではなく作製されたエポン試料でも賦活化により免疫染色が可能になれば病理診断や研究に有意である。試料は病理検査室に提出された病理検体の切除胃を用いた。病変部から離れた正常部分を極少量採取し、(1) 4%パラホルムアルデヒド固定→水溶性樹脂包埋。(2) 2.5%グルタルアルデヒド固定、2%オスミウム酸固定→エポン包埋。それぞれ超薄切片を作製しホルムバール膜張りニッケルメッシュに載せた。(1)は通常の免疫染色を行い、(2)は賦活化の検討に用いた。一次抗体はMUC5AC抗体、二次抗体はProtein A-gold (15nm)を使用した。(1)水溶性樹脂包埋試料による免疫電顕一次、二次抗体の濃度を検討し、一次抗体は5倍、二次抗体は10倍希釈で確実に染色された。結果は胃粘膜上皮細胞の細胞質に金粒子が標識され、核、粘液、他の細胞には確認されなかった。(2)エポン樹脂包埋試料による抗原賦活化の検討無水シトラコン酸処理について検討した。電気ポットを使用し、98℃30分,1,4,8時間処理した後(1)の条件で免疫染色をした。1時間まではあまり差はなく、切片に小さな穴があいたが他にダメージはなかった。金粒子は確認できなかった。4時間では小さな穴のような空砲が多くなり、金粒子は観察されたが組織全体にあり非特異反応と思われた。8時間では切片のダメージは大きくなったが、染色結果に差はなかった。賦活化後に10%過酸化水素水でエッチングを行っても金粒子に有意な差はなかった。賦活化前にエッチングすると、エポン切片がぼろぼろになり観察は不可能だった。エッチングの時間を短縮し、賦活化も15分と短くすると観察は可能で、金粒子も確認されたがやはり非特異があった。今後、非特異反応を抑えるための工夫が必要と思われた。

Immunostaining for the purpose of preparation and activation of samples for possible pathological diagnosis The specimen was submitted to the pathological examination room for pathological examination and gastric resection. A very small amount of the normal part was taken from the diseased part,(1) 4% of the normal part was fixed, and then embedded in water-soluble resin. (2)2.5% The ultra-thin sections were prepared by using the same method. (1)(2) The normal immunostaining procedure;(3) The activation procedure. Primary antibody MUC5AC antibody, secondary antibody Protein A-gold (15nm) (1)The concentration of the primary and secondary antibodies in the water-soluble resin embedded sample was 5 times higher than that in the primary antibody and 10 times higher than that in the secondary antibody. Results Cytoplasmic gold particles in gastric mucosa epithelial cells were identified as nuclear, mucinous and other cells. (2)Antigen activation of resin-embedded samples and analysis of anhydrous acid treatment After treatment with electricity for 30 minutes at 98℃ for 1, 4 and 8 minutes, the conditions for immunostaining were as follows: 1 time Gold particles are confirmed. 4. Time is small and empty, and gold particles are detected and organized as a whole. 8 Time to cut off the big pieces, staining results are different. After activation, 10% hyperacidified water is added. It is impossible to observe the changes in the structure of the tissue before activation. Time is shortened, activation time is shortened, detection time is shortened, and gold particles are confirmed. In the future, non-specific anti-suppression efforts are necessary.