培養基板の微細形状設計によるiPS細胞の分化誘導評価

通过培养基质的精细形状设计评价iPS细胞分化诱导

• 批准号: 25930025
• 负责人: 井上 諭
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-25930025/
• 关键词: iPS; 分化; 培養基材

【研究目的】培養機材の微細茎状設計によって、iPS細胞の接着形態や自己分泌サイトカインなどを制御する技術を確立するとともに、分化の方向性の違いを評価する。【研究方法】1. iPS細胞(201B7)の継代 : フィーダー細胞(SNL76/7)を用い、未分化を維持したままiPS細胞を培養。2. 直径0.5㎛、2.0㎛、高さ2.0㎛のナノピラー培養基材を準備。(材質はPDMS、ポリスチレンの2種類)3. iPS細胞の分化誘導 : iPS細胞から極力フィーダー細胞を除去。ピペッティングや酵素処理でiPS細胞をsingle cellとし、液性因子を添加していない基礎培地を用いてLaminin-5でコーティングした培養基板(平面、直径0.5㎛、2.0㎛の3種類をそれぞれPDMSとポリスチレンの2種類の材質、計6種類)に播種。5. 培養基板の微細形状設計が及ぼす、iPS細胞の分化の方向性の違いをリアルタイムPCRにより評価する【研究成果】まずiPS細胞をsingle cellにし、培養基材に接着させた後に、single cellのまま培養を続けることが非常に困難で、実験が安定せず、必要量の細胞を確保できないなどの問題が発生した。播種密度を増やし、細胞量を確保すると、基材に接着したのちに直ぐにcolonyになり、一つの細胞にかかる力を調整することは困難で、本実験の目的を果たすことは出来なかった。また、回収したcolonyをリアルタイムPCRにかけ分化の方向性を評価したところ、基材の違いにより確かに遺伝子発現に差が出ることは確認できたが、細胞のlot、継代数の違いで発現する遺伝子に差があり、再現性は認められず、有意な結果は得られなかった。培養基材の違い、細胞にかかる外力の違いで分化方向に差がでる可能性は非常に高いと考えるが、本実験を行うには細胞1つにかかる力を均衡にする必要があり、まずはiPS細胞をcolonyではなくsingle cellの状態で培養し得る技術が必要だったが、実験中はそれをなし得なかった。colonyのまま培養し、さまざまな細胞株で分化方向に差がみられるかの検討も試みたが、研究代表者の異動により、実験は行えず、本実験は終了した。

[objective] to develop the micro-mechanical equipment, the stem-shaped device, the iPS cell, and then to make sure that the technical system is in place, and that the direction of the system is different. [research methods] 1. IPS cell culture (201B7): cell culture of iPS cell (SNL76/7) was maintained by undifferentiated and undifferentiated cells. two。 The diameter is 0.5 ", 2.0", and the height is 2.0 ". (materials and materials) 3. IPS cell differentiation guidance: iPS cells are forced to remove cells. In this paper, we use the enzyme to analyze the iPS cell single cell, the liquid factor to add the substrate, the Laminin-5 substrate (plane, diameter 0.5mm, 2.0mm) to sow the material (plane, diameter 0.5mm, 2.0mm). 5. Substrate micrometer shape design and micrometer, iPS cell differentiation direction, cell differentiation, PCR cell, single cell, substrate, single cell, single cell, stability, safety, safety and safety. Sow the density, make sure that the density is good, and then make sure that the base material is used to make sure that the colony is in good condition, and that the cell will try its best to adjust the temperature, and the purpose of this experiment is to make sure that the temperature is low. The direction of differentiation is different in the direction of colony. The substrate is used to make sure that the error is correct. The cell lot, the algebraic data, the error, the difference, the difference. In order to improve the quality of the substrate, the cell, the external force, the differentiation direction, the possibility of differentiation, the possibility of differentiation. The differentiation direction of colony cell line is different from that of other cell lines, and that of the representative of the research team.