動脈硬化症発症関連リポタンパクであるアクロレイン化ＬＤＬの測定系の開発と臨床応用

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【背景・目的】我が国において、心疾患と脳血管疾患は、悪性新生物と共に日本人の三大死因とされてきた。これらの疾患の背景には、生活習慣病の一つである動脈硬化症が存在する。我々は、マクロファージの脂質球内に多量のコレステリルエステルを蓄積させる、新規変性リポタンパクであるアクロレイン化LDLを見出した。しかし、実際の血中濃度についてはその測定法が確立されていないことから明らかになっておらず、またどのような集団的背景においてアクロレイン化LDLが変動するかも明らかでない。以上のことから、将来的には臨床検査として運用可能な方法での、ヒト血漿中のアクロレイン化LDLの測定法の開発を試みることを目的とした。【方法】1. アクロレイン化LDLの調製 : LDLを10mMのアクロレインと37℃で24時間反応させ調製した。2. 抗体の選定 : 過去の実験データ、および論文検索により、ELISAに用いる抗体を選定した。3. ELISA法による測定 : 選定した抗体を用い、アクロレイン化LDLの測定法について検討した。【成果】抗アクロレイン抗体として、ヒト動脈硬化病巣におけるアクロレイン化タンパクの検出実績があり、安定して供給されているマウスモノクローナル抗体(mAb5F6)を選定した。抗LDL抗体として、ウェスタンブロット法でヒトLDLの検出実績のあるウサギポリクローナル抗体(sc-25542)を選定した。これらの抗体を用いてELISA法によるアクロレイン化LDLの測定を試みたところ、HRP-TMB検出系を用いると、1μg/mLのアクロレイン化LDLを検出出来ることが示された。今後、更に低濃度のアクロレイン化LDLの検出が可能となるよう測定系の高感度化を実現することで、ヒト血漿中のアクロレイン化LDLの定量が可能となると期待される。