高分化型脂肪肉腫の組織標本を用いたプロテオーム解析とその病理診断学的応用

[目的]本研究では, 高分化型脂肪肉腫と脂肪腫の鑑別・診断に有用かつ, 一般医療施設で施行可能な免疫組織化学法(IHC)で検出できる新たな蛋白質マーカーの同定を目指した. マーカー検索の手法としてホルマリン固定・パラフィン包埋(FFPE)組織標本からのタンパク質抽出と質量分析法によるプロテオーム解析を用いることとした.[研究方法]脂肪組織, 脂肪腫および高分化型脂肪肉腫各3症例のFFPE組織から2種類の手法(1 : グアニジン塩酸塩を用いた自家製試薬での抽出, 2 : 市販試薬での抽出)によりタンパク質を抽出・精製し, ABI/4800 plus MALDI TOF/TOF analyzerで質量分析に供した. 得られたタンパク質のうち, 高分化型脂肪肉腫のみ複数例から検出されたタンパク質および脂肪肉腫や悪性腫瘍で生物学的に妥当と考えられる候補タンパク質を選定した. これらの候補タンパク質に対する抗体を用いたIHCを脂肪腫, 高分化型脂肪肉腫の各10症例について行い, 染色性を評価した.[結果]質量分析により, 脂肪組織から469種, 脂肪腫から353種, 高分化型脂肪肉腫337種のタンパク質が検出された. 高分化脂肪肉腫のみから検出されたタンパク質は192種あり, 複数症例から検出されたタンパク質は8種であった. 検出されたペプチド数が多いものを中心に3種の候補タンパク質を選定した. IHCを行った結果, 高分化型脂肪肉腫と脂肪腫とで染色性が異なる候補タンパク質を2種同定した.[今後]凍結組織を用いたウエスタンブロット法などにより候補タンパク質の発現を確認し, 高分化脂肪肉腫と脂肪腫での存在と発現の差異を確認する. 更に, 候補タンパク質2種に対するIHCの症例数を増やし, より詳細な検討を行う予定である. 最終的に, 候補タンパク質を高分化脂肪肉腫の新規診断マーカーとして臨床現場で利用可能な検査モデルの構築を目指す.

[目的]本研究では, 高分化型脂肪肉腫と脂肪腫の鑑別・診断に有用かつ, 一般医療施設で施行可能な免疫組織化学法(IHC)で検出できる新たな蛋白質マーカーの同定を目指した. マーカー検索の手法としてホルマリン固定・パラフィン包埋(FFPE)組織標本からのタンパク質抽出と質量分析法によるプロテオーム解析を用いることとした.[研究方法]脂肪組織, 脂肪腫および高分化型脂肪肉腫各3症例のFFPE組織から2種類の手法(1 : グアニジン塩酸塩を用いた自家製試薬での抽出, 2 : 市販試薬での抽出)によりタンパク質を抽出・精製し, ABI/4800 plus MALDI TOF/TOF analyzerで質量分析に供した. 得られたタンパク質のうち, 高分化型脂肪肉腫のみ複数例から検出されたタンパク質および脂肪肉腫や悪性腫瘍で生物学的に妥当と考えられる候補タンパク質を選定した. これらの候補タンパク質に対する抗体を用いたIHCを脂肪腫, 高分化型脂肪肉腫の各10症例について行い, 染色性を評価した.[結果]質量分析により, 脂肪組織から469種, 脂肪腫から353種, 高分化型脂肪肉腫337種のタンパク質が検出された. 高分化脂肪肉腫のみから検出されたタンパク質は192種あり, 複数症例から検出されたタンパク質は8種であった. 検出されたペプチド数が多いものを中心に3種の候補タンパク質を選定した. IHCを行った結果, 高分化型脂肪肉腫と脂肪腫とで染色性が異なる候補タンパク質を2種同定した.[今後]凍結組織を用いたウエスタンブロット法などにより候補タンパク質の発現を確認し, 高分化脂肪肉腫と脂肪腫での存在と発現の差異を確認する. 更に, 候補タンパク質2種に対するIHCの症例数を増やし, より詳細な検討を行う予定である. 最終的に, 候補タンパク質を高分化脂肪肉腫の新規診断マーカーとして臨床現場で利用可能な検査モデルの構築を目指す.