深在性真菌症のFFPE組織を用いた分子形態学的な同定および解析方法の確立

深部真菌病FFPE组织分子形态学鉴定分析方法的建立

• 批准号: 22K06944
• 负责人: 青山 智志
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06944/
• 关键词: 深在性真菌症; FFPE組織; 超微細構造; 真菌叢; 走査型電子顕微鏡; メタゲノム解析; プロテオーム解析

深在性真菌症は致死的な経過をたどるが、微生物検査での真菌の検出率は50％以下と低い。また、病理組織診断での真菌の同定は形態診断にとどまっており、患者の適切な治療導入に対応できていない。申請者は、原因不明の肺炎で死亡し、病理解剖で深在性真菌症の診断となった症例を経験した。超微細構造観察と菌叢解析の結果、病巣では複数の真菌により真菌叢を形成していた。以上のような背景から、深在性真菌症の同定・解析手法の確立を通して、病態理解を深め、治療成績を向上させたいと考え、本研究を想起した。本研究課題達成のため、深在性真菌症のホルマリン固定パラフィン包埋（FFPE）組織を用いて、①走査型電子顕微鏡（SEM）による真菌の超微細構造の観察・同定、②抽出DNAを用いたシークエンス法による同定および、③次世代シーケンサーを用いた真菌叢解析(メタゲノム解析)、④真菌由来抽出タンパク質を用いたプロテオーム解析を行う。本研究は、深在性真菌症を、非培養的、多層的、網羅的に解析し、その病態を明らかにすることで、適切な治療法選択、新たな治療戦略創出への寄与を目指す。これまでに、深在性真菌症の解剖症例を用いて、FFPE組織からSEM観察標本の条件検討を実施した。FFPE組織から、様々な厚さの薄切標本を作成し、様々な標本作成条件を試み、SEM観察標本を作成した。SEM S-4300 (HITACHI), TM4000Plus (HITACHI)を用いて、観察を行い、アスペルギルス、カンジダの菌体観察に成功した。立体構造観察には、厚さ15-30umが適していた。また、アスペルギルスニガー感染症例で、シュウ酸カルシウム結晶を多数沈着している領域で、SEM-EDSを用いた、二次元元素マッピングを行ったところ、カルシウムの分布が、結晶沈着と一致して観察され、SEM-EDSの有用性が確認された。

The death rate of deep mycosis is lower than 50%, and that of microorganisms is low. Histopathology and histopathology showed that the morphology of the fungus was the same as that of the fungus, and the patient was treated by surgical treatment. Applicants, unknown causes, pneumonia, death, pathological anatomy, deep mycosis, chronic mycosis. The results of ultramicroscopic examination and analysis of bacteria, the complex number of diseases, the formation of fungi, the formation of fungi and the formation of fungi. The above background, the same analytical method of deep mycosis, the understanding of the state of the disease, the treatment of mycosis, the examination of the background, the homology analysis of deep mycosis, the understanding of the state of the disease, the treatment of the disease, and the memory of this study. In this study, the results of this study were as follows: in this study, deep mycosis was fixed, fixed and embedded (FFPE), 1 walking computer microphone (SEM) was used to detect fungi, 2 DNA was extracted, and three generations of mycosis were used to determine the same concentration, and three generations were tested by fungal analysis. (4) the origin of the fungus was extracted from the fungus, and the analysis line was analyzed. In this study, deep mycosis, non-culture, multiplex, web-based analysis, diagnosis and treatment of chronic mycosis, diagnosis and treatment of chronic mycosis, chronic mycosis, chronic mycosis The autopsy cases of chronic mycosis and deep mycosis were used. FFPE tissue SEM was used to observe the conditions of the disease. The FFPE organization document, the thickness tag, the thin cut tag, the profile tag, the SEM inspection tag, and the inspection tag are made. SEM Smur4300 (HITACHI), TM4000Plus (HITACHI) successfully examined the bacteria by using the following tools: check, etc. The three-dimensional structure is 15-30um thick, and the thickness is very small. Most of the patients were affected by infection, SEM-EDS, secondary elements, distribution, consistency, usefulness, and usefulness.

项目成果

Pathological classification of desmoplastic reaction is prognostic factor in cervical adenocarcinoma

• DOI: 10.1007/s00795-022-00329-6
• 发表时间: 2022-07-25
• 期刊: MEDICAL MOLECULAR MORPHOLOGY
• 影响因子: 1.8
• 作者: Akimoto, Taishi;Takasawa, Akira;Saito, Tsuyoshi
• 通讯作者: Saito, Tsuyoshi

タイト結合蛋白質Claudin-1は細胞接着、微絨毛形成を制御する

紧密连接蛋白 Claudin-1 调节细胞粘附和微绒毛形成

• 发表时间: 2021
• 作者: 高澤 啓;高澤 久美;秋元 太志;青山 智志;村上 太郎;北嶋 洋志;真柄 和史;小野 佑輔;及能 大輔;鈴木 拓;小山内 誠
• 通讯作者: 小山内 誠

Aberrant expression of JAM-A contributes to malignancy of cervical adenocarcinoma via PVR/CD155

JAM-A的异常表达通过PVR/CD155促进宫颈腺癌的恶变

• 发表时间: 2022
• 作者: 村上 太郎;高澤 啓;青山 智志;小野 佑輔;高澤 久美;村田 雅樹;小山内 誠
• 通讯作者: 小山内 誠

子宮頸部腺がんで異所性高発現するclaudin-6はがん悪性化に寄与する

Claudin-6 在宫颈腺癌中高度异位表达，导致癌症恶性

• 发表时间: 2022
• 作者: Akira Takasawa;Yui Ito;Kumi Takasawa;Taishi Akimoto;Misaki Ota;Tomoyuki Aoyama;Yusuke Ono;Daisuke Kyuno;Tsuyoshi Saito;Makoto Osanai
• 通讯作者: Makoto Osanai

細胞接着と微絨毛形成におけるタイト結合蛋白質claudin-1の役割

紧密连接蛋白claudin-1在细胞粘附和微绒毛形成中的作用

• 发表时间: 2022
• 作者: Akira Takasawa;Kumi Takasawa;Tomoyuki Aoyama;Taro Murakami;Kazufumi Magara;Yusuke Ono;Daisuke Kyuno;Makoto Osanai
• 通讯作者: Makoto Osanai