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HIVプロウィルス転写活性制御におけるAP-1の役割

AP-1 在调节 HIV 原病毒转录活性中的作用

基本信息

批准号：
08770222
负责人：
渡辺賢治
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Kitasato Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770222/
关键词：
HIV-1 LTR AP-1 NF-κB

项目摘要

HIVプロウイルスの転写活性制御に関わるAP-1の役割を具体的に検討し、さらに従来知られているNF-κBとどのような関連があるのかについて検討を加えるために以下の実験を行なった。1.細胞培養およびHIV1-LTRの転写活性の測定細胞としてヒトプロモノサイトのU937とT細胞クローンのJurkat細胞を用いた。HIV-1のプロモーターであるLTRとレポーター遺伝子であるクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ(CAT)発現遺伝子を連結したプラスミド(pHIV1-CAT)をエレクトロポレーションにてトランスフェクトした後、PMAで刺激するとHIV1-LTRの転写活性が促進される。ゲルシフトアッセイにてNF-κBおよびAP-1の活性化をみると高濃度のPMAではNF-κBが活性化されるが、4ng/ml以下のPMAではNF-κBの活性化はみられず、AP-1のみが活性化されていた。2.HIV-1 LTRの転写活性に与えるAP-1とNF-κBの役割についての検討 AP-1を細胞内で過剰に発現させ、それがHIV-1 LTRの転写活性にどのような影響を与えるかを検討した。このためにはNF-κBの構成因子であるp65とp50の発現ベクターおよびAP-1の構成因子であるc-Jun,c-Fosの発現ベクターをpHIV1-CATとともにトランスフェクトして24時間後に細胞内蛋白を回収し、CAT蛋白の発現をCAT ELISAにて測定した。NF-κB(p65とp50)のトランスフェクションではHIV-1 LTRが活性化されるが、AP-1(c-Junとc-Fos)のトランスフェクションではHIV-1 LTRは活性化されなかった。NF-κB,AP-1を同時にトランスフェクトすると、AP-1はNF-κBのHIV-1 LTRが活性化を抑制した。内因性のAP-1の影響を完全に消去するためにc-Junの転写活性ドメインの欠如したJun dominant negativeを用いた。このJun dominant negativeは過剰に発現されると正常なc-Junが働けなくなる。このJun dominant negativeを加えるとAP-1のNF-κB抑制効果は消失した。

HIV, please write the specific information of the active control system, which is used to cut the AP-1. In order to know the details of the system, you can find out the details of the system. You can find out the details of the system by adding the following information to the system. 1. Cell culture, HIV1-LTR, writing activity, cell culture, cell culture, Jurkat cell culture, cell culture, cell culture HIV-1