aly候補遺伝子の受精卵導入によるalymphoplasia症の回復試験

受精卵导入aly候选基因对发育不全症的恢复试验

• 批准号: 08770234
• 负责人: 北田 一博
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770234/
• 关键词: 免疫不全; リンパ節; パイエル板; 胚中心; マウス; ミュータント; ポジショナルクローニング; BAC

ALYマウスは、全身のリンパ節欠損を主徴とする免疫不全ミュータントであり、その原因遺伝子吋aly(alymphoplasia)は、第11染色体上のセントロメアから約63cMの位置に存在する。申請者らは、既に、遺伝学的にaly遺伝子の存在が示されている約300kbpの全ゲノム領域を単離することに成功している。しかしながら、あらかじめ、このゲノムコンティグ中にaly遺伝子が含まれていることを、遺伝学的方法以外の手法で確認しておくことが好ましい。そこで、本研究においては、ALYマウス由来の受精卵にaly遺伝子座近傍のゲノムDNAを導入し、alymphoplasia症の回復性の検討を拭みた。まずトランスジェネシスによる回復性を検討した過去の文献を調査したところ、形態形成に関わるような発現制御が複雑である遺伝子の回復には、コスミドクローンでは発現調節領域のすべてを包含するには必ずしも充分でないことが判明した。続いて、ALYマウス由来の受精卵が凍結保存に耐え得るか否かを検討したところ、凍結融解後も80%以上の生存性を示し、かつ細胞膜がピペット注入に十分な強度を保持していることが判明した。そこで、aly遺伝子の存在が示されている約300kbpの全ゲノム領域を重複してカバーしているBACクローンを3クローン選択し、そのDNAをrare cutterであるNotIで消化後、ALYマウス由来の凍結受精卵にマイクロインジェクション法にて注入した。現在までに、48匹の産仔が得られている。しかしながら、その中に注入DNAがALYマウスゲノムに導入された個体は存在しなかった。現在もなお、BAC DNAの導入個体を得るべく、さらに条件設定を行いながら実験を継続中である。BACクローンを安定して受精卵に導入する系を確立できれば、今後、迅速な疾患原因遺伝子の同定も可能となることが期待される。

ALYマウスは, whole body のリンパ defective を main 徴 とする immune deficiency ミュータントであり, そのreasons left 伝子吋al y (alymphoplasia), it exists at a position of approximately 63 cM on chromosome 11. The applicant's らは, に, and 伝学's にaly 伝子の出show されているabout 300kbpの全ゲノムfield を単利することにsuccessfulしている.しかしながら、あらかじめ、このゲノムコンティグ中にaly伝子が containまれていることを、The method other than the method of 伝学でconfirmationしておくことが好ましい.そこで, this study is a においては, ALYマウス origin のfertilized egg にaly 伝子杝 near のゲノムDNA を introduction し, alymphoplasia disease の検 Discussion を wiping みた. The past document of the past The survey is completedある伝子のrespond to には、コスミドクローンでは発Now adjust the fieldのすべてをincludes するには必ずしも fully でないことが cognizant した.続いて, ALYマウス origin のfertilized egg が frozen preservation にresistant え る か 不 か 検 ask し た と こ ろ, も 8 after freezing and thawing The viability of 0% or more has been demonstrated, and it has been shown that the strength of the cell membrane is maintained at a very high level after being injected into the cell membrane.そこで、aly缝子の性出说されているabout 300kbpの全ゲノム区を重合してカバーしているBACクローンを3クローン选択し、そのDNAをrare After the cutter is digested, the frozen fertilized eggs of ALYMatsu are injected into the frozen fertilized egg. Now it's time to give birth to 48 piglets.しかしながら、その中に inject DNA がALYマウスゲノムに introduce された individual は exist しなかった. Nowadays, BAC DNA is introduced into the individual, and the conditions of the introduction of the DNA and the conditions of the さらに are set. The BAC system is stable and the fertilized egg is introduced into the system and the system is established. From now on, it is possible to quickly eliminate the cause of the disease and wait for it.