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伊東細胞の電位依存性カルシウムチャンネルに及ぼす各種サイトカインの影響:パッチクランプ法による解析

各种细胞因子对伊藤细胞电压门控钙通道的影响：膜片钳法分析

基本信息

批准号：
08770389
负责人：
大井手弘純
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770389/
关键词：
伊東細胞カルシウムチャンネル TGF-β1 BrdU α-smooth muscle actin

项目摘要

S-D系雌性ラット(体重200-300g)から分離してカバーガラスづえに播種・培養した肝伊東細胞を用いて、電位依存性カルシウムチャンネルの存在について経時的に観察した。培養7日目までの細胞ではカルシウムチャンネルはほとんど同定することはできなかったが、それ以降は徐々にカルシウムチャンネルを観察することが出来るようになり、その発現頻度は10日目で約30%、14日目で約60%であった。BrdU labeling indexを用いて細胞分裂・増殖とカルシウムチャンネル発現の因果関係を調べたところ培養5日目までは約60%と盛んに増殖しているが、7日目で16%、10日目で6%、14日目で1.6%と低下していた。また伊東細胞の活性化を表すα-amooth muscle actinも10日目以降に強く発現しており、伊東細胞が分裂・増殖した後に活性化してmyofibroblast-like cellになるとカルシウムチャンネルの発現が増えることが判明した。そこで、このカルシウムチャンネル発現に及ぼすサイトカインの影響を検討するため、伊東細胞の線維化能を高めるTGF-β1を1ng/mlの濃度で培養液に添加し、24時間毎にfreshなTGF-β1入り培養液に変えながら経時的にカルシウムチャンネルの動態を観察したが、その発現率に著変なかった。今後はその他のサイトカインやアルコールで培養したり、細胞外気質としてcollagen、ラミニン、フィブロネクチンなどで培養皿をcoatingしてカルシウムチャンネルに及ぼす影響を検討していく予定である。

S-D female (weight 200-300g) was observed during isolation, seeding and culture of Ito cells in the liver. After 7 days of culture, the frequency of cell development was about 30% on the 10th day and 60% on the 14th day. BrdU labeling index was used to regulate the causal relationship between cell division, proliferation, and development. At day 5, it was about 60%, proliferation was about 16%, proliferation was about 6%, and proliferation was about 1.6%. The activation of Ito cells showed that α-amooth muscle actin decreased after 10 days, and the activation of myofibroblast-like cells increased after 10 days. In addition to TGF-β1 at a concentration of 1ng/ml in culture medium for 24 hours, the dynamics of cell growth and the rate of cell growth were observed. In the future, we will investigate the effects of culture, extracellular culture, collagen, culture, culture and culture on culture plates.