脳虚血損傷発生におけるSH基含有タンパク質の高次構造変化
脑缺血损伤过程中SH基蛋白的构象变化
基本信息
- 批准号:08770471
- 负责人:
- 金额:$ 0.7万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
- 财政年份:1996
- 资助国家:日本
- 起止时间:1996 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
筆者は脳虚血6時間海馬CA1において明らかにIP3特異的結合量が減少することを報告した.また,IP3受容体のモノクロナール抗体による免疫組織学的検討では虚血,非虚血で明かな染色性の低下がなかったことよりIP3受容体自体の減少(受容体破壊もしくはDOWN-REGULATION)の可能性よりもIP3結合能の低下が示唆された.この変化は虚血2時間の時点でも見られるが,30分虚血では見られないことより,2時間から30分虚血の間で変化が起こっているものと考えられた.以上よりIP3特異的結合量減少はIP3受容体の構造変化に起因する可能性が高いと考えられる.また,近年Thimerosal(SH基に働く)によりIP3受容体の高次構造が変化し,IP3結合能を変化するとの報告があり,脳虚血においても同様にSH基によるIP3特異的結合能の変化を中心に検討している.今回はのジスルフィド結合を変化させ,酸化還元状態を変化させる酵素,チオール特異的アンチオキシダントに注目した.チオール特異的アンチオキシダントはChaeらにより牛脳よりクローニングされた25-kDaの酵素であり(Chae et al.Proc Natl Acad Sci USA 91:7022-7026,1994.),現在までに数々報告されている酸化還元酵素であるsuperoxide dismutase(SOD)とは異なりタンパク質高次構造を形成するジスルフィド結合を変化させる.このようなことから脳虚血時のタンパク質高次構造変化に重要な役割をはたしていると考えられる.そこで脳虚血時のチオール特異的アンチオキシダントの発現及び脳内分布を調べる目的で,チオール特異的アンチオキシダントの変性オリゴヌクレオチドプローブを用いてPCR法により目的のcDNAを採取し,これを用いてタンパク質を大腸菌に発現させ,抗体を作成に成功した.作成した抗体にてWestern blot法を行ったところ,正常脳にて25kDaのところにバンドを確認した.2時間および6時間一側総頚動脈結紮モデルの虚血側では,この抗体によるバンドの出現に変化がなった.今後,虚血負荷の検討及び免疫組織学的に脳内分布を調べていく予定である.
After 6 hours of blood deficiency in the sea, the combined amount of the CA1 test IP3 special report is very low. The immunology of IP3 recipient is characterized by deficiency blood, non-deficiency blood, low staining, low staining, low IP3 receptor, low possibility, low IP3 binding energy, low IP3 binding energy. It is necessary to treat the deficiency of blood at 2: 00, 30: 00, 30: 00 and 30: 00 respectively. The combination of the above IP3 characteristics is less than that of the IP3 acceptor. The cause is high, and the possibility is high. In recent years, in recent years, Thimerosal (SH gene therapy) has been used to improve the quality of IP3 receptors. the combination of IP3 can improve the accuracy of the report, and the combination of deficiency of blood and SH can improve the sensitivity of the center. This time, we have combined the chemical reaction, acidified the meta-state, acidified the enzyme, and made a special effort to pay attention. This is a special report on the use of 25-kDa enzymes (Chae et al.Proc Natl Acad Sci USA 91 Chae et al.Proc Natl Acad Sci USA 7022-7026, 1994.). It is now reported that the enzyme has been acidified and reduced by enzyme superoxide dismutase (SOD). This has been done in a number of times. During the treatment of deficiency of blood, it is necessary to make a high-order chemical treatment system, which is an important part of the system. During the period of deficiency of blood, the virus was detected and distributed in the blood. The purpose of the test was to use the PCR method to obtain the cDNA, and the antibody was successfully made. The antibody Western blot method was used to detect the antibody, and the normal antibody test was used to confirm the diagnosis. 2 after 6 hours of the test, the blood deficiency test was detected, and the antibody antibody test was detected. From now on, the distribution of deficiency blood and immunology is predetermined.
项目成果
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专利数量(0)
Tanaka K et al.: "Flow threshold for reduction of cyclic AMP binding in the hippocainpus CAI and other brain regions" J Cereb Blood Flow Met. 16. 468-473 (1996)
Tanaka K 等人:“减少海马 CAI 和其他大脑区域中环 AMP 结合的流量阈值”J Cereb Blood Flow Met。
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Matsumoto M et al.: "Ataxia and epileptic seizunes in mice locking type 1 inositol 1,4,5-triprophate recepter" Nature. 379. 168-171 (1996)
Matsumoto M 等人:“锁定 1 型肌醇 1,4,5-三丙酸受体的小鼠共济失调和癫痫发作”,Nature。
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