臍帯血幹細胞移植の実用化を臍帯血中多能性造血漿細胞の増幅に関する研究

脐带血中多能血浆形成细胞的扩增及其在脐带血干细胞移植实际应用中的研究

• 批准号: 08770603
• 负责人: 安藤 昭和
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770603/
• 关键词: 臍帯血幹細胞移植; CFU-GM; 臍帯血バンク

(1)臍帯血採取法胎盤からの臍帯血の採取法としてはまず胎盤娩出前に産科医により臍帯静脈を直接穿刺採血し(シリンジ法)、胎盤娩出後に臍帯動静脈にそれぞれカテーテルを挿入し動脈側より抗凝固剤含有の緩衝液を還流しながら静脈側より胎盤内に残った臍帯血を採取した(還流法)。シリンジ法にて採取し得た臍帯血の量は72.7±38.9ml(最小18ml最大140ml)、有核細胞数9.7±5.9×10^8、単核球数3.5±2.4×10^8で、還流法では有核細胞数1.6±1.4×10^8、単核球数0.8±0.5×10^8を回収し得た。いずれの方法も採血量、採取細胞数ともに個体差が大きかった。シリンジ法で充分量の臍帯血を採取できた胎盤を還流しても殆ど細胞は回収できず、また還流法は方法も煩雑で熟練を要し、臍帯血バンク導入に当っての臍帯血採取法として還流法は適していない。(2)臍帯血幹細胞の分離法将来的に臍帯血バンクの導入を考え、赤血球除去が必要で、多くの臍帯血を保存する必要もあり、省スペースのために幹細胞の分離法を検討した。具体的にはParcollを用いた比重遠心法とHESを用いた沈降法の差を比較検討した。有核細胞回収率、単核球回収率、CFU-GM回収率はそれぞれParcoll法で27.7±7.0%,56.6±13.0%、42.2±30.4%、HES法で62.7±21.4%,56.6±22.4%,76.4±61.3%であった。単核球回収率、CFU-GM回収率ともに分離法間に統計学的な有意差は認めなかった。Parcoll法では多核球の混入が少なく凍結保存の省スペースにつながるが方法がやや煩雑であり、HES法は勘弁ではあるが多核球の混入が多く凍結保存の際のvolumeが多くなる欠点がある。

(1)Umbilical blood sampling method: umbilical vein puncture method before placenta delivery, umbilical vein puncture method after placenta delivery, umbilical vein puncture method after placenta delivery, umbilical vein puncture method, umbilical vein puncture method. The total amount of umbilical cord blood obtained by the method was 72.7±38.9ml(minimum 18ml and maximum 140ml), the number of nucleated cells was 9.7±5.9×10^8, and the number of nucleated spheres was 3.5±2.4×10^8. The number of nucleated cells was 1.6±1.4×10^8, and the number of nucleated spheres was 0.8±0.5×10^8. The number of blood samples collected and the number of cells taken vary greatly. In addition, it is necessary to conduct a thorough examination of the umbilical cord blood sample and the placental blood sample and the method of returning the umbilical cord blood to the placenta. (2)Methods for Separating Umbilical Blood Stem Cells in the Future Methods for Separating Umbilical Blood Stem Cells in the Future Methods for Separating Umbilical Blood Stem Cells Specific Parcoll Method and HES Method Comparison The recovery rates of nucleated cells, single nucleated spheres and CFU-GM were 27.7± 7.0%, 56.6 ±13.0%, 42.2±30.4% by Parcoll method and 62.7± 21.4%, 56.6 ± 22.4%, 76.4 ±61.3% by HES method. Statistical differences between nuclear return rate, CFU-GM return rate and separation method Parcoll method is used to mix polynuclear spheres and freeze them. HES method is used to mix polynuclear spheres.