角化細胞におけるFas抗原刺激のシグナル伝達機構の解析

Fas抗原刺激角质形成细胞的信号转导机制分析

• 批准号: 08770618
• 负责人: 高橋 英俊
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Asahikawa Medical College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770618/
• 关键词: Fas抗原; Protein kinase C; DAG; IP3; keratinocyte

各臓器を構成する細胞は常に増殖と死のバランスを保ちながら、その機能を維持している。例えば、表皮細胞においては角層へと分化する過程で細胞膜の内面にcornified envelopeと呼ばれる強固な裏打ち構造が形成され、terminal differentiationという細胞死と連動したドラスチックな変動がもたらされる。このような細胞死はあらかじめ予定された死であり"programmed cell death"とよばれている。最近個体および細胞系の発生、分化、成熟の過程においてprogrammed cell deathのひとつであるapoptosisが重要な機能的意義をもっていることが明らかになってきている。本研究の目的は現在まで知られているapoptosis関連蛋白である、Fas蛋白の表皮細胞にapoptosisを誘導する際のシグナル伝達機構におけるprotein kinase Cとの関係を明らかにすることである。我々が現在保有している、SV40-transformed human keratinocytesを用いて、Fas抗原刺激に際して細胞内のProtein kinase C activity、IP3およびDAGの変化について検討した。抗Fas抗体(1μg/ml)刺激後10分でDAGは最大となり20分後には刺激前の状態にもどった。Protein Kinase C activityについては抗Fas抗体(1μg/ml)刺激後、細胞内Protein Kinase C activityのみ10-15分で最大となり40分後には刺激前にもどった。細胞膜分画のProtein kinase C activityおよびIP3は抗Fas抗体刺激で変化はみられなかった。また、これら一連の反応がprotein kinase Cのどのprotein kinase Cサブタイプ(α、β、γ、δ、ε、ζ、η)によるかをの各種抗体を用いて免疫沈降法を行いリン酸化反応を検討した。抗Fas抗体(1μg/ml)刺激後10分でprotein kinase C-ζのみが特異的にリン酸化された。以上の結果から表皮細胞のFas抗原刺激の際に細胞内DAGが上昇し、protein kinase C-ζが特異的に活性化されapoptosisを誘導するものと推定した。

Each organ is composed of cells that are constantly proliferating and dying, maintaining the function, and maintaining the function. Example えば、Epidermal cells においてはkeratin layer へとdifferentiation するprocess でThe inner surface of the cell membrane にcornified envelope とcall ばれるStrengthen なri hit ちstructure がform され、terminal differentiationというcell deathと连动したドラスチックな変动がもたらされる. "programmed cell death"とよばれている. Recently, the process of growth, differentiation and maturation of individual cell lines has been programmed cell. The meaning of the function of death is important. The purpose of this study is to know that the apoptosis-related protein and Fas protein in epidermal cells induce apoptosis and the protein kinase Cとの情を明らかにすることである. I currently have している, SV40-transformed human keratinocytes を use いて, Fas antigen-stimulated にintercellular Protein kinase C activity, IP3 およびDAG の変化 について検 Discussion した. Anti-Fas antibody (1μg/ml) stimulates the DAG for 10 minutes and reaches the maximum level after 20 minutes, and reaches the DAG before stimulation for 20 minutes. Protein Kinase C activity after anti-Fas antibody (1μg/ml) stimulation, intracellular Protein Kinase C activity for 10-15 minutes, maximum after 40 minutes, and before stimulation. Protein kinase C activity of cell membrane is divided into IP3 and anti-Fas antibody stimulation.また、これら一连のanti応がprotein kinase Cのどのprotein kinase Cサブタイプ (α, β, γ, δ, ε, ζ, η) various antibodies were prepared using the immunoprecipitation method using the いて immunoprecipitation method. Anti-Fas antibody (1μg/ml) stimulates protein kinase C-ζのみがspecific にリン acidified された. The above results indicate that epidermal cells are stimulated by Fas antigen, intracellular DAG increases, protein kinase C-ζ is specifically activated, and apoptosis is induced, and it is presumed that this is the case.

项目成果

高橋英俊: "角化細胞における分化と細胞死との関係-角化細胞におけるFas抗原の発現解析を中心として-" 日本リディアオリリ-協会平成7年度年報. 19. 21-26 (1996)

高桥秀俊：“角质形成细胞分化与细胞死亡的关系 - 聚焦角质形成细胞中 Fas 抗原的表达分析 -” 日本 Lydia Oriliary Association 年度报告 1995. 19. 21-26 (1996)