アトピー性皮膚炎患者皮膚のスフィンゴミエリンアシラーゼによる水解生成物の解析

特应性皮炎患者皮肤中鞘磷脂酰化酶水解产物的分析

• 批准号: 08770688
• 负责人: 村田 恭子
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770688/
• 关键词: アトピー性皮膚炎; バリアー機能障害; セラミド; スフィンゴミエリナーゼ; スフィンゴミエリン; スフィンゴミエリンアシラーゼ; スフィンゴシルホスホリルコリン

アトピー性皮膚炎は乾燥性皮膚(atopic skin)がその発生基盤となり慢性の湿疹病変が形成されると考えられるが、この乾燥性皮膚においては、皮膚のバリアー機能が障害されていることがわかっている。われわれは角質細胞間脂質、ことにセラミドの減少がアトピー性皮膚炎のバリアー機能障害に関与していることを明らかにしてきた。セラミドの代謝はその合成酵素であるスフィンゴミエリナーゼ(SMase)、β-グルコセレブロシダーゼ(BGCase)と分解酵素であるセラミダーゼ(CDase)の酵素活性バランスにより調節されており、すでにBGCaseとCDaseの酵素活性は健常人との間に有意差が認められないことは明らかにしている。AD,健常人の前腕屈側よりテープストリッピングにより採取した各層、およびAD,健常人の皮膚生検から得た表皮を材料として、酵素蛋白を抽出しコリンのメチル基がC^<14>で標識されたスフィンゴミエリンを基質として用い、スフィンゴミエリン水解活性を測定し、ラジオアイソトープ薄層クロマトグラフィー(TLC)で解析した。また、C^<14>で標識されたスフィンゴミエリンに市販のアシラーゼを反応させTLCで解析し、さらにHigh-performance liquid chromatography-mass spectometryを用い検討した。今回の検討で、AD患者ではスフィンゴミエリン水解活性は著しい亢進を示し、その反応生成物の解析から、本来のセラミド合成酵素であるSMaseに替わり、スフィンゴミエリンアシラーゼ活性をもつ酵素が誘導され、その結果セラミドにかわりスフィンゴミエリンホスホリルコリンが生成され、セラミド量の減少を来していることが示唆された。今後はさらに市販のアシラーゼ、スフィンゴシルホスホリルコリンを抗原として作製したモノクロナル抗体を用いて、免疫組織化学的手法により、生検した患者皮膚においてその局在を検討したい。

Dry skin (atopic skin) is the basis for the development of chronic eczema. In addition, the reduction of keratinocyte lipids and the reduction of functional impairment in dermatitis are related to the development of keratinocyte lipids. The enzyme activity of BGCase and CDase is regulated by the enzyme activity of SMase, BGCase and catabolic enzyme. AD, healthy people's front wrist flexion side, skin tissue, skin tissue, epidermal tissue material, enzyme protein extraction, matrix, hydrolysis activity determination, <14>TLC analysis. The <14>TLC analysis was conducted using High-performance liquid chromatography-mass spectrometry. In the present study, AD patients have shown that the hydrolysis activity of AD is increased, the analysis of its products is changed, the original enzyme synthesis is changed, the activity of AD is changed, the enzyme induction is changed, and the result is that AD patients have increased the hydrolysis activity of AD, the amount of AD is decreased. In the future, we will continue to investigate the use of antigen-specific antibodies, immunohistochemical methods, and biological methods in the skin of patients.

项目成果

Murata Yasuko: "Abnormal Expression of Sphingomyelin Acylase in ATopic DermaTiTis : An Etialogic Factor for Ceramide Deficiency?" Journal of Investigative Dermatology. 106. 1242-1249 (1996)

Murata Yasuko：“特应性皮肤炎中鞘磷脂酰化酶的异常表达：神经酰胺缺乏的病因？”