骨芽細胞の形態形成、分化誘導におけるHSPの役割の分子生物学的研究

HSP在成骨细胞形态发生和分化诱导中作用的分子生物学研究

• 批准号: 08770831
• 负责人: 宇治原 誠
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770831/
• 关键词: 骨芽細胞; 分化; ストレスタンパク

1.対象細胞骨芽細胞系のcell lineでfibroblast様の形態を持ち、vitamin Dで刺激すると分化誘導され、敷石状になる細胞を検討した。HuO9,OST1,ROS17/2.8の3種類の細胞を培養した。このうち我々が入手したOST1はvitamin Dで刺激する前からすでに敷石状の形態をとっていたため、HuO9,ROS17/2.8を対象細胞とした。2.分化誘導における形態変化10nM活性型vitamin Dを添加し、位相差顕微鏡で細胞形態の変化を観察した。ROS17/2.8細胞は3日目から敷石状に徐々に変化した。しかしHuO9細胞は増殖が極めて速く、また重層化が顕著であったため、この細胞の形態の変化は断定しえなかった。3.分化誘導におけるHSPの発現10nM活性型vitamin Dを添加し、3日後にtotal RNA、タンパクを抽出した。total RNAはノザンブロッテイングの後、R.Morimotoから提供を受けたHSP70cDNA、および理化学研究所から分譲されたHSP90cDNAより作成したプローブでハイブリダイズを行った。分化誘導したHuO9細胞ではHSP70mRNA量の低下を認めた。ROS17/2.8細胞はノザンブロッテイングでの解析では検出できなかった。また抽出したタンパクをSDSPAGEの後、ウエスタンブロッテイングを行い、ヒトHSP70,90に特異的な抗体(ストレスジェン社から購入)を用いECL法で描出した。HuO9細胞、ROS17/2.8細胞ともに、HSP72蛋白量の低下を認めた。4.酸化ストレスによるHSPの発現分化誘導した細胞と誘導前の細胞にBSO,AAPHを添加しHSP72蛋白量の変化を検討した。BSOで軽度にHSP72蛋白量が増加した。

1. For the elephant cell bone bud cell line, the cell line, the fibroblast様, the morphology, the vitamin D, the stimulation, the differentiation induction, the stone-like cells, the morphology. Three types of cells, HuO9, OST1, and ROS17/2.8, were cultured.このうち我々がGet したOST1はvitamin Dでstimulates the appearance of stone-like morphology before stimulation, HuO9, ROS17/2.8 and elephant cells. 2. Differentiation is induced by adding 10nM active vitamin D, and the cell morphology is changed by phase contrast microscopy. ROS17/2.8 cells are of 3-day age and have a stone-like appearance. The HuO9 cells can be multiplied very quickly, the cells can be multi-layered, and the cells can be morphologically modified. 3. Differentiation was induced by adding 10nM active vitamin D to HSP, and after 3 days, total RNA was extracted. total R.Morimoto HSP70cDNA provided by RNA Novel The Institute of Science and Technology of Science and Technology has divided the HSP90 cDNA into a single product and produced it. The reduction of HSP70mRNA level in HuO9 cells after differentiation induction was confirmed. ROS17/2.8 cell analysis and analysis of ROS17/2.8 cells.また出したタンパクをSDSPAGEの后、ウエスタンブロッテイングを行い、ヒトH Antibodies specific to SP70 and 90 (purchased from Seton Co., Ltd.) were profiled using the ECL method. HuO9 cells, ROS17/2.8 cells, and HSP72 protein levels were found to be low. 4. Acidified HSP can be used to induce differentiation of cells and cells before induction, and BSO can be used to increase the amount of HSP72 protein added with AAPH. BSO has been used to increase the amount of HSP72 protein.