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脳・中枢神経系に特異的発現する甲状腺ホルモン代謝酵素遺伝子のクローニング

大脑和中枢神经系统特异表达的甲状腺激素代谢酶基因的克隆

基本信息

批准号：
08770837
负责人：
豊田長興
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Kansai Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770837/
关键词：
甲状腺ホルモン代謝酵素

项目摘要

平成8年度研究課題とした脳・中枢神経系に特異的発現する甲状腺ホルモン代謝酵素であるType2 iodpthyronine deiodinase(D2)cDNAが、米国のグループによりカエル尾より単離され報告された。(Davey JC,JBC,1995,270)そこで私は、哺乳類D2酵素の構造を明らかにする為ラットD2cDNAの単離を試みた。報告されたカエルD2cDNAの塩基配列をもとにRT-PCR法にて翻訳領域を増幅しprobeとして用い、ラット脳cDNA libraryより約5kbのクローンを単離し塩基配列を決定した。単離したクローンは、カエルD2の翻訳領域と約70%の相同性を示す部分を含み、既報のTypel deiodinase同様にin-frameの中心付近に通常終止コドンであるTGAコドンが存在し、cDNAの3'-非翻訳領域の特異的な塩基配列の存在により稀なアミノ酸であるselenocyteine(SeCys)に翻訳される事が予測された。カエルD2cDNAとの相違点は、終止コドン(TAG)の12塩基5'-側に2番目のTGAコドンを認めた。更に既報のラットType1及びカエルType2 mRNAが約2kbであるのに対して、Northern blot解析の結果よりラットD2mRNAは約7kbとより長い事が明らかになった。単離したクローンをCDM-8発現ベクターに挿入しelectroporation法を用いてCOS細胞及びHEK293細胞に導入したが、導入した細胞ホモジネートにD2の酵素活性の発現は認められなかった。この結果より今回単離したクローンは翻訳領域を含んでいるものの3'非翻訳領域にTGAコドンをSeCysに翻訳するに充分な機能を持つ塩基配列が欠けている3'-deletedcDNAと考えられた。極最近、米国のグループによりラット褐色脂肪細胞cDNA libraryよりD2の翻訳領域を含む部分的なcDNA約2kbが単離され報告された。(Croteau W,JCI,1996,98)報告さたクローンは、私が単離したクローンと100%同一の翻訳領域を含むものの3'-非翻訳領域が約500bpと短く、細胞に導入しても酵素活性が発現しなかった。現在までにそれ自体でD2酵素活性を発現しうるcDNAの報告は無く、現在その単離を試みている。

Heisei 8 Research Topic: Central Neurological System Specific Metabolism Enzyme Type 2 iodpthyronine deiodinase(D2)cDNAが, U.S. のグループによりカエルtail より単利され report された. (Davey JC, JBC, 1995, 270) The structure of mammalian D2 enzyme is the same as that of D2cDNA. Report on the application of RT-PCR method of D2cDNA based RT-PCR method and the use of probe in the field, and the use of ラット脳cDNA libraryよりAbout 5kbのクローンを単里し塩basearrayをdeterminationした. About 70% of the translation area of 単利したクローンは, カエルD2 is the same as shown in part, and the reported typel Deiodinase is the same as the center of the in-frame, usually terminated by the presence of TGA, cDNA's 3'-non-translation The existence of the domain-specific selenocyte ligand is unknown and has not yet been predicted. The カエルD2cDNA has the same conflicting point and the 12-base 5'-side terminating gene (TAG) has the same TGA コドンをidentification. Updated reports of のラットType1 and びカエルType2 mRNA are about 2kbであるのに対して, Northern The results of the blot analysis showed that the D2mRNA was about 7kb long and the length of the protein was the same. The electroporation method used in the single CDM-8 発成ベクターに insertion method uses いてCOS cells. And the enzyme activity of HEK293 cells introduced into HEK293 cells and the enzyme activity of D2 introduced into HEK293 cells were confirmed.このRESULTSより This chapter 単里したクローンはturned訳区を containんでいるものの3'non-turned訳区にTGAコドンをSe Cys is fully functional and maintains the base configuration of Cys. It is 3'-deleted cDNA and is tested. Very recently, the U.S. Brown Adipocyte Brown Adipocyte cDNA Library D2 Containing Part of the cDNA was reported to be approximately 2 kb in size. (Croteau W, JCI, 1996, 98) Report on the same translation field of 100% of the same translation field The をcontaining むものの3'-non-translation domain is about 500bp short, and the enzyme activity of the cells is introduced into the しなかった. Now the autogenous D2 enzyme activity has been reported and the cDNA report has been reported.