PML-RARα遺伝子導入マウス造血前駆細胞株をモデルとした白血病発症機構の解析

以转染PML-RARα基因的小鼠造血祖细胞系为模型分析白血病发病机制

• 批准号: 08770861
• 负责人: 高山 信之
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770861/
• 关键词: 急性前骨髄球性白血病; PML-RARα; 32Dc13細胞; all-trans retinoic acid; 顆粒球分化; G-CSF; 腫瘍化; apoptosis

急性前骨髄球性白血病(APL)では,疾患特異的な染色体異常であるt(15;17)転座がほとんどの症例に認められ,この結果形成されるPML-RARα遺伝子が,白血病の発症に深く関与していると考えられている.本研究は,非腫瘍性のマウスIL-3依存性細胞株を受容細胞として,PML-RARα遺伝子を強制発現させ,その造腫瘍能,細胞分化に及ぼす作用などを検討することにより,APLの発症機構をより深く解明することを目的としている.現在までの進行状況は以下の通りである.マウスIL-3依存性細胞株として32Dc13細胞を用いた.32D細胞は,培地中のIL-3をG-CSFに置換することにより,顆粒球に分化する性質があるが,本実験で用いる細胞が確かに上記の形質を持っていることを確認した.PML-RARαの発現ベクターであるpCMXPML-RARαと選択マーカーであるpSRαneoとを電気穿孔法により32D細胞にco-transfectionし,G418耐性クローンをいくつか単離した.しかし,単離したすべてのクローンにおいて,PML-RARαの発現はRT-PCR法で確認できず,PML-RARαが32D細胞に対し毒性を持つためtransformantが単離できない可能性が考えられた.そこで,当初の方針を変更し,clontech社のTet-Off systemを用いて,PML-RARαの発現を調節できるようにした系を開発した.この系を用い,PML-RARαの新たな発現ベクターによるtransfectionの実験を開始したところである.現在,PML-RARα導入32D細胞において,PML-RARα誘導前後での細胞の造腫瘍能,分化誘導能,apoptosis耐性能等を解析中である.

Acute proosteoblastic leukemia (APL) is a disease specific chromosomal abnormality that is closely related to the development of leukemia. In this study, non-tumorous IL-3 dependent cell lines were subjected to cell culture,PML-RARα gene stress development, tumorigenesis, cell differentiation, and apoptosis. The status of the current situation is as follows: IL-3-dependent cell line pCMXPML-RARα was used in 32Dc13 cells. pSRαneo was used in 32D cells for co-transfection of pCMXPML-RAR α by electroporation. G418 The detection of PML-RARα was confirmed by RT-PCR, and the possibility of PML-RAR α toxicity to 32D cells was examined. In this regard, the original policy changes,clontech's Tet-Off system has been used,PML-RARα has been adjusted, and the system has been developed. In this system,PML-RARα is a new discovery. At present,PML-RARα is introduced into 32D cells, and the tumorigenesis, differentiation induction and apoptosis tolerance of cells before and after PML-RARα induction are analyzed.

项目成果

Nakajima H: "All-trans and 9-cis retinoic acid enhance 1,25-dihydroxyvitamin D_3 induced monocytic differentiation of U937 cells" Leukemia Research. 20. 665-676 (1996)

Nakajima H：“全反式和 9-顺式视黄酸增强 1,25-二羟基维生素 D_3 诱导的 U937 细胞的单核细胞分化”白血病研究。

Muto A: "Serial quantification of minimal residual disease of t (8 ; 21) acute myelogenous leukemia with novel RT-competitive PCR assay" British Journal of Haematology. 95. 85-94 (1996)

Muto A：“使用新型 RT 竞争性 PCR 检测对 t (8 ; 21) 急性髓性白血病微小残留病进行连续定量”《英国血液学杂志》。

Kizaki M: "Establishment and characterization of a novel acute promyelocytic leukemia cell line (UF-1) with retinoic acid resistant features" Blood. 88. 1824-1833 (1996)

Kizaki M：“具有视黄酸抗性特征的新型急性早幼粒细胞白血病细胞系（UF-1）的建立和表征”血液。

Kizaki M: "Retinoid resistance in leukemic cells" Leukemia and Lymphoma. (in press).

Kizaki M：“白血病细胞中的类维生素A抵抗”白血病和淋巴瘤。