メサンギウム細胞におけるAGE受容体(RAGE)の機能と発現調整の検討

系膜细胞中 AGE 受体 (RAGE) 的功能和表达调控的检查

• 批准号: 08770890
• 负责人: 山路 安義
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770890/
• 关键词: AGE; RAGE; 糖尿病

human RAGEはN末が細胞外、C末が細胞内のsingle transmembraneの蛋白質であるが、その細胞内ドメイン由来の15アミノ酸のペプタイドを作製、KLHに結合し、家兎を免疫した。血清の抗ペプタイド活性をBSAにペプタイドを結合しドットプロットにより確認した。一方、human RAGEのgenomic sequenceをもとにプライマーを設計し、human RAGEのcDNAをhuman lung由来のmRNAよりRT-PCRによりクローニングした。ついで、human RAGE cDNAをpcDNAampに組み込み、human RAGEの哺乳類発現ベクター(h-RAGE-pcDNAamp)を作製した。h-RAGE-pcDNAampをリポフェクチンを用いてOKP細胞に導入し、対照のnativeのOKP細胞とともにimmuno blotを行った。上述の抗血清では、h-RAGE導入OKP細胞に約50Kdの新たなバンドが出現した。このバンドはpreimmune血清では認めなかった。さらに、この新たなバンドは免疫に用いたペプタイドでブロックされた。以上より、発現ベクターの機能、ならびに、抗RAGE抗体の存在を確認した。また、アンチセンスRAGE発現ベクターも作製した。BSAをglucoseとincubateし、AGE-BSAを作製、蛍光活性はこれまでの報告と一致した。現在NFKBで活性化されるIL6プロモーターのCATリポータープラスミドとRAGEを共発現し、RAGEの受容体機能を検討中である。

Human RAGE is made from a single transmembrane protein located outside the cell at the end of N, a single transmembrane protein located inside the cell at the end of C, and a 15-amino acid protein derived from the intracellular membrane. It combines with KLH and provides immunity to the family. The serum anti-inflammatory activity was confirmed by ELISA. The genomic sequence of human RAGE was designed by RT-PCR. Human RAGE cDNA pcDNAamp is included in the genome, and mammalian development of human RAGE (h-RAGE-pcDNAamp) is controlled. h-RAGE-pcDNAamp was introduced into OKP cells and native OKP cells were immmuno blotted. When the antiserum was introduced into OKP cells, about 50Kd of new antiserum appeared. This is the first time that we have seen such a thing. This is the first time I've ever seen a doctor. The function of anti-RAGE antibody was confirmed. The first step is to open the door and open the door. BSA glucose incubate, AGE-BSA production, photoactivity, and so on. Now NFKB is activated, and the CAT profile of RAGE is displayed. The receptor function of RAGE is discussed.